Odborné textyRepetitorium - klinická genetikaRepetitorium - likvorologie

Základy cytologického vyšetření likvoru

AJAXE

Základy cytologického vyšetření likvoru

 

Likvor, mok mozkomíšní, je za fyziologických okolností kapalinou čirou a bezbarvou, která vyplňuje mozkové komory, cisterny a prostory subarachnoidální a vak plen v páteřním kanálu. Celkem činí objem likvoru u dospělého přibližně 150 až 180 ml. K produkci likvoru dochází v chorioidálních plexech mozkových komor, odtud likvor proniká přes Sylviův mokovod pro 4. komory, dále přes její strop na konvexitu hemisfér, do cisteren, páteřního kanálu a centrálního kanálku míšního. Celkově dochází u dospělého člověka k denní produkci asi 500 až 600 ml likvoru. Likvor se vstřebává v Pacchionských granulacích, které vyúsťují do nitrolebních žilních splavů, a v perineurálních štěrbinách mozkových a míšních nervů.

 

Likvor bývá odebírán nejčastěji lumbální cestou, u pacienta ležícího či sedícího, méně často pomocí punkce komorové či subokcipitální.

 

Počet elementů v likvoru bývá v našich zemích stanovován v komůrce Fuchs-Rosenthalově, kde má vyšetřované pole rozměry 4*4 mm s plochou 16 mm2. Při síle vrstvy 0,2 mm vzniká objem 3,2 µl (mm3) a proto bývá zjištěný počet buněčných elementů uváděn ve zlomku děleném třemi (zaokrouhleno). Korektní vyjádření s ohledem na soustavu SI a s přihlédnutím k definicím Národního číselníku laboratorních položek je nutné výsledky počtu elementů v objemu likvoru udávat jako tzv. početní koncentraci s odpovídající jednotkou 106/l.

 

Za ještě fyziologický se běžně považuje počet do 3,1*106/l (tradičně se tento výsledek udává v podobě 10/3), počet zvýšený bývá pak označován jako pleiocytóza. Normální počet elementů v likvoru však nevylučuje jejich patologickou celulární skladbu. Počet elementů v komůrce podle Fuchs-Rosenthala by měl být zásadně vždy stanoven, i tehdy, je-li zhotoven trvalý cytologický preparát, neboť ten přesné zjištění počtu přítomných elementů neumožňuje. Stanovení počtu jaderných elementů se provádí v nativním preparátu barveném roztokem fuchsinu v kyselině octové, stanovení počtu erytrocytů pak v nativním preparátu nebarveném. Barvicí roztok totiž dobře znázorní jádra buněk, avšak rozruší membrány erytrocytů, čímž je arteficiálně zjištěn jejich nižší počet. Ke zhotovení nativního preparátu postačí 100 mikrolitrů likvoru a 10 mikrolitrů barvicího roztoku. Dále lze během počítání jaderných elementů v komůrce dle Fuchs-Rosenthala diferencovat likvorové elementy na mononukleáry - elementy s nesegmentovanými jádry - a na polynukleáry - segmenty (viz přehled). Pro bezpečné rozlišení likvorových elementů však je nutné paralelní zhotovení trvalého cytologického preparátu, a to alespoň v základním barvení. Takovýto preparát nás již může velmi spolehlivě informovat o zastoupení buněčných populací ve sledovaném vzorku likvoru a patologických dějích zde probíhajících. Při použití dalších barvicích metodik cytochemických a imunocytologických se dále možnosti cytologické likvorové diagnostiky rozšiřují.

 

 

 

Příprava cytologických preparátů

 

K zhotovování cytologických preparátů z likvoru se používá různých metodik cytosedimentačních, cytocentrifugačních a metody izolace buněčných elementů přes membránové filtry. Metody cytosedimentační se vyznačují možností záchytu morfologicky velmi dobře uchovaných elementů, nevýhodou může být nižší procento záchytu, zejména u oligocelulárních vzorků. Při použití metodik cytocentrifugačních může dojít k narušení buněčných elementů, bývá však značně vyšší záchyt elementů. Metoda membránových filtrů není u nás běžně používána, nevýhodou metody je následné barvení oddělených likvorových elementů i s použitým filtrem. V naší laboratoři používáme k přípravě cytologických preparátů z likvoru metody cytosedimentační.

 

 

 

 

 

Celulární skladba likvoru

 

Za fyziologických poměrů jsou v likvoru přítomny pouze tzv. mononukleáry, tedy elementy s nesegmentovanými jádry, ke kterým patří lymfocyty a monocyty (viz přehled). Převažujícím buněčným typem jsou za normálních okolností lymfocyty, jejichž zastoupení kolísá mezi 65 až 80 % .Při arteficiální příměsi krve do likvoru v průběhu lumbální punkce dochází k poranění okolních měkkých tkání či žilních pletení v páteřním kanálu a do vzorku odebraného likvoru pak pronikají elementy periferní krve, tedy zejména erytrocyty, ale i elementy jaderné, např. i granulocyty, jejichž nález je jinak v likvoru vždy patologickým jevem. Zcela fyziologicky se v likvoru mohou vyskytovat buňky výstelky likvorových cest, tedy elementy ependymové, arachnotelové a buňky plexus chorioideus. V komůrce podle Fuchs-Rosenthala mohou tyto elementy dosti zdárně imitovat buňky nádorové, je tedy nutno k jejich bezpečnému odlišení zhotovit z likvoru trvalý cytologický preparát, a to alespoň v základním barvení.

 

Při přítomnosti nádorového onemocnění můžeme i dnes často pozorovat přítomnost nádorových buněk v likvoru, jejich odlišení však může být někdy velmi obtížné a často vyžaduje použití speciálních metodik. Nádorové elementy lze v likvoru pozorovat jednak při přítomnosti lokalizovaného nádorového procesu v CNS nebo v páteřním kanálu, jednat ve formě tzv. maligní meningeální infiltrace, kdy jsou meningy a likvorový prostor osídleny maligními elementy i bez přítomnosti lokalizované metastázy. Ten to jev vídáme dosti často zejména u malignit hematologického původu.

 

 

LIKVOROVÉ ELEMENTY - PŘEHLED:

 

LYMFOCYTY

           

MONOCYTY

 

GRANULOCYTY

neutrofilní, eosinofilní, basofilní

 

MAKROFÁGY

 

BUŇKY VÝSTELKY LIKVOROVÝCH CEST

 

ERYTROCYTY

 

ATYPICKÉ ELEMENTY

 

NÁDOROVÉ BUŇKY

 

LEUKEMICKÉ BUŇKY

 

Další informace

 

Pavel Adam

 

.