Tenkovrstvá (planární) chromatografie se aplikuje při stanovení aminokyselin v biologických materiálech jako screeningový test. Postup lze rozdělit na přípravu vzorku, chromatografické dělení a identifikaci aimunokyselin.

 

 

Příprava vzorku

·              deproteinace (např. sulfosalicylovou kyselinou)

·              odstranění lipidů, anorganických solí a dalších látek, které mohou interferovat (extrakce, iontoměničová pryskyřice, elektrodialýza)

 

Separace vzorku (posuzuje se obvykle kvalitativní zastoupení AMK)

 

Stacionární  fáze

·              preferován papír (vrstva celulózy)

·              vzorky krve nebo moči bývají často odebírány přímo na disk papírového filtru

 

Mobilní fáze (vyvíjecí soustava)

Výběr rozpouštědlového systému závisí na typu stacionární fáze a na kombinaci AMK, která má být úspěšně detekována.
Příklad vyvíjecí směsi: n-butanol : aceton : kyselina octová : voda (35:35:10:20 v/v)

 

Detekční reagencie

·              ninhydrin – isatin (skupinové činidlo)

·              ninhydrin – kolidin (polychromatické činidlo, snadné rozlišení jednotlivých AMK)

·              o-chlor-toluidin (univerzální pro aminokyseliny)

·              Pauliho činidlo (detekce histidinu, tyrosinu, rozlišuje imidazoly a fenolické sloučeniny)

·              Ehrlichovo činidlo (indoly - purpurově, hydroxyindoly - modře, aromatické aminy – žlutě)

·              Fluorescamin (univerzální pro aminy, aminokyseliny, peptidy)

·              Iodoplatinát (rozlišuje aminokyseliny s obsahem síry)

·              Sacagukiho reakce (specifická pro arginin a substituované guanidiny)

 

 

 

Jaroslava Vávrová

 

.