HPLC (High-Performance Liquid Chromatography) se při stanovení aminokyselin v biologických materiálech používá jako kvantitativní test pro sledování nebo potvrzení diagnózy. Vysokoúčinná kapalinová chromatografie je preferovanou rutinně využívanou separační technikou pro kvantitativní stanovení jednotlivých aminokyselin.

 

Základní přednosti použití HPLC:

·              vysoká citlivost

·              kvalitní rozlišení

·              čas analýzy do 1 hod.

·              obvykle gradientová eluce

·              univerzálně se využívají kolony naplněné reverzní stacionární fází

·              omezeno riziko dekompozice vzorků

 

Derivatizace vzorku:

Jednotlivé postupy využívají derivatizaci před-/ post- kolonovou podle sestavy HPLC.

Jako derivatizační činidla jsou nejčastěji využívány:

·              OPA (o-ftaldialdehyd) - reaguje s primárními aminoskupinami,

·              FMOC -  derivuje sekundární aminoskupiny,

·              fluorescamin,

·              dansylchlorid,

·              fenyl-isothiokyanát,

·              ninhydrin

§         využívání programovatelných autosamplerů umožňuje automatizaci derivatizace (minimální spotřeba vzorku i reagencií) a dávkování vzorku před nástřikem na separační chromatografickou kolonu

 

Detekce (možnost programovatelných změn nastavení parametrů detektorů)

·              fotometrická (UV/VIS, DAD),

·              fluorimetrická,

·              elektrochemická

 

 

 

Jaroslava Vávrová

.