Elektroforetické techniky
využívané při stanovení proteinů
1. Elektroforéza sérových proteinů
2. Imunoelektroforéza
3. Imunofixace
4. Kapilární elektroforéza
5. Dvojrozměrná elektroforéza
6. Immunoblotting
1. Elektroforéza sérových proteinů
|
Denzitometrický záznam
elektroforézy bílkovin krevní plazmy v agarózovém gelu (fibrinogen
čárkovaně). |
|
2. Imunoelektroforéza
Příklad aplikace: rozlišení
monoklonální a polyklonální gamapatie
3.
Imunofixace - metoda 10krát citlivější než imunoelektroforéza
Fáze imunofixace
·
elektroforéza
·
aplikace antiséra
·
barvení a promývání
Příklad aplikace: určení
antigenního typu lehkých řetězců u paraproteinemií IgM
4. Kapilární elektroforéza
|
|
Příklad aplikace: Elektroforeogram proteinů
mozkomíšního moku Použití kapilární
elektroforézy umožňuje provést analýzu bez předchozího zahuštění likvoru
s potřebou minimálního objemu vzorku. |
Kapilární elektroforéza se běžně
využívá pro stanovení zastoupení proteinů v séru, využití této techniky pro
charakterizaci paraproteinu se provádí metodou imunosubtrakce.
5. Dvojrozměrná elektroforéza
Příklad aplikace: využívána
pro analýzu heterogenity monoklonálních imunoglobulinů, zejména monoklonálních
lehkých řetězců
6. Immunoblotting / Western Blotting
Po rozdělení v gelu jsou
bílkoviny přeneseny na nitrocelulózovou membránu obvykle elektrickým proudem
nebo kapilárním tokem. Strip nebo membrána reaguje pak s činidlem obsahujícím
protilátku.
Příklad aplikace: metoda je
vhodná pro detekci jednotlivých bílkovin ve směsi, je rovněž alternativním postupem pro typizaci paraproteinémií
Jaroslava Vávrová
.