Stanovení fenytoinu
Synonyma
Antisacer, Dilantin, Dintoina, difenylan sodný, difenylhydantoin, Ditan,
Epanutin, Epinat, Fenitoina, Fosfenytoin, Sodanton
Preanalytická fáze
Odběr
nejméně 4 - 5 h, případně 8 h po aplikaci nebo před následující dávkou.
Stanovení
se provádí v séru popřípadě v plazmě (antikoagulanty K2EDTA
nebo heparin). Riziko falešně nízkých výsledků v důsledku adsorpce léku na
separační gely.
Stabilita
vzorku 20 – 25 °C (sérum, plazma): 2 dny, 4 – 8 °C (sérum): 4 týdny, 4 – 8 °C
(plazma): 6 týdnů, -20 °C (sérum): 5 měsíců, -20 °C (plazma): 1 rok.
Poznámky k
analytické metodě
Imunochemické postupy jsou nejběžnější a mohou být plně
automatizované. Používá se radioimunoanalýza, enzymová imunoanalýza (EMIT,
CEDIA i ELISA) a fluorescenční homogenní polarizační technika (FPIA) a
chemiluminiscenční analýza. Rovněž jsou k dispozici soupravy pro
imunonefelometrii a imunoturbidimetrii. GLC a HPLC se používají spíše jako
srovnávací a forenzní metody, než pro rutinní praxi.
Pro kompetitivní RIA 125I-fenytoin
se uvádí vychýlení -1 až +26 % a výtěžnost 100 – 109 %.
EMIT používá jako značku
glukóza-6-fosfátdehydrogenázu a kompetitivní uspořádání imunochemické reakce.
Citlivost je poměrně malá, což je způsobeno stérickou zábranou po reakci
konjugátu antigen-enzym s protilátkou a homogenním kompetitivním
uspořádáním. Reprodukovatelnost v sérii CV 5,2 – 6,0 %, mezi dny 7,2 – 8,3
%, výtěžnost 107,5 – 108,5 %.
Homogenní enzymová imunoanalýza CEDIA používá β-galaktosidázu geneticky upravenou na
dva inaktivní fragmenty. Donorová část je navázaná na fenytoin (konjugát) a
konkuruje s lékem ze vzorku o omezený počet vazebných míst protilátky.
Protilátka kryje vazebné místo donoru a proto po přidání volného akceptoru se
může vytvořit aktivní enzym jen z volného konjugátu a nikoliv
z imunokomplexu. Substrátem pro barevnou detekční reakci je b-D-galaktopyranosid chlorfenolové červeně a uvolněné barvivo se sleduje
při 575 nm. Reprodukovatelnost v sérii CV 2,0 – 2,8 %, mezi dny 4,7 – 6,8
%; výtěžnost 97,8 – 105,9 %, detekční limit 3 µmol/l.
Kompetitivní ELISA používá křenovou
peroxidázu jako marker. Reprodukovatelnost v sérii CV 3,3 – 10,2 %, mezi
dny 5,1 – 13,2 %; výtěžnost 90 – 96 %.
Fluorescein jako marker se používá při homogenní fluorescenční
polarizační imunoanalýze (FPIA). Celková reprodukovatelnost CV je 7 %,
vychýlení +7 %.
Jiná fluorescenční imunoanalýza používá fluorescein izothiokyanát (FITC)
jako značku. V prvním kroku dochází k soutěži mezi značeným a
neznačeným fenytoinem o omezený počet vazebných míst první protilátky. Pak se
přidá druhá protilátka a vznikne precipitát, který se centrifuguje.
V supernatantu je fluorescence přímo úměrná koncentraci fenytoinu ve
vzorku.; výtěžnost 92 – 106,5 %; citlivost 1,2 pmol/l na zkumavku.
Kompetitivní chemiluminiscence s esterem akridinu jako značkou má reprodukovatelnost v sérii
CV 2,7 – 2,9 %, mezi dny 2,9 – 4,1 %.
Imunoturbidimetrický postup používá latexové částice potažené fenytoinem, které soutěží o omezený
počet vazebných míst na protilátce s fenytoinem ze vzorku. Senzitivita
metody je 3,13 µmol/l; reprodukovatelnost celková CV 3,7 – 5,2 %; výtěžnost
94,4 – 101,4 %.
Kinetická nefelometrie umožňuje
reprodukovatelnost v sérii CV 2,0 – 5,5 %, mezi dny 3,1 – 4,5 %.
Plynová chromatografie Reprodukovatelnost
v sérii CV 5,1 – 5,9 %, mezi dny 6,8 – 7,6 %.
K dispozici je také stanovení HPLC s vodní mobilní fází
a UV detekcí. Mezidenní reprodukovatelnost je CV 0,5 – 10 %; výtěžnost 90 -110
%.
Toleranční rozpětí v EKK je 24 %.
Interference
Výsledky stanovení fenytoinu snižují: antacida, bleomycin, cis-platina,
etanol, fenylbutazon, karbamazepin, kortikosteroidy, kyselina listová,
nitrofurantoin, ostatní barbituráty, oxacilin, rifampin, salicyláty,
sulfisoxazol, sulfonylmočovina, valproová kyselina, vinblastin, živočišné uhlí,
aj.
Výsledky stanovení fenytoinu zvyšují: amiodaron, azapropazon, cimetidin,
citronan, disulfiram, flukonazol, fluoridy, halotan, hemoglobin (10 g/l +10 %),
chloramfenikol, ibuprofen, imipramin, izoniazid, kyselina arachidonová,
levedopa, metronidazol, mikonazol, nifedipin, omeprazol, oxalát, sulfonamidy,
topiramát, trazodon, triacylglyceroly (11,3 mmol/l +12 %), tricyklická
antidepresiva, trimetoprim, aj.
Další informace
Petr Štern, 2010-07-16