Vychýlení - Data z dokumentace IVD vs. data z měření referenčních materiálů
Data z dokumentace výrobců IVD [12] obvykle neposkytují hodnoty vychýlení, které by bylo možné použít efektivně k výpočtu odhadů nejistot měření. Tato data jsou získána a poskytována běžně metodou regresní analýzy. Prezentované měřicí postupy jsou obvykle srovnávány pouze s modifikovanými postupy, pocházejícími od stejného výrobce. Výsledkem jsou většinou velmi úzké korelace, ovšem většinou nikoliv s referenčními postupy.
Příklad 1: Stanovení kreatininu v séru a moči Jaffého metodou - firma Roche
Hodnocená metoda: Jaffé s kompensací na blank a činidly Roche.
Srovnávací metoda: Jaffé bez kompensace a s činidly Roche. Tato metoda nebude v zásadě poskytovat pravdivější výsledky, než metoda hodnocená a testuje spíše míru shody tam, kde ji lze již předem očekávat. Nikoliv míru vychýlení od pravdivějšího postupu.
Příklad 2: Stanovení TSH v séru
Hodnocená metoda: luminiscenční imunoanalýza – systém DPC Immulite 2000, 3. generace
Srovnávací metoda: DPC Immulite-1, 3. generace
Novější aplikace metody je zjevně porovnána s aplikací na starším systému téhož výrobce. Takto lze posoudit kontinuitu měření při přechodu na novější měřicí systém, ale nelze získat data, postačující k vyčíslení odhadu nejistoty.
Nejpřijatelnějším způsobem (obecně doporučovaným) stanovení hodnoty vychýlení je analýza vhodných referenčních materiálů. V obou výše uvedených příkladech 1 a 2 poskytne mnohem konkrétnější a průhlednější informace.
4.3. Výsledky stanovení vychýlení pomocí mezilaboratorních porovnávání
Měření referenčních materiálů v programech mezilaboratorního porovnání
Program: CAP (College of American Pathologists, USA)
Počty účastníků: n = 5624 při měření kreatininu, n = 2580 při měření TSH
QCM: nativní zmrazené směsi lidských sér (k dosažení maxima matriční přiměřenosti)
Vztažné hodnoty: certifikovaná koncentrace kreatininu, stanovená v referenčních laboratořích referenční metodou ID-GC-MS u kreatininu. Průměrné hodnoty výsledků měření účastníků v případě stanovení TSH.
Publikováno: [3, 4]
4.3.1. Kreatinin
Program CAP USA
Certifikovaná hodnota: 80 µmol.l-1 kreatininu
Počet výrobců v souladu s IVD: 10
Počet stejnorodých skupin (výrobce, metoda, přístroj): 50
Bias u nativního kontrolního materiálu interval: -6 % až + 35 %
Bias pro QCM (lyofilizát) interval (pro koncentraci 70,7 µmol.l-1): –19 % až +21 %
Bias pro QCM (lyofilizát) interval (pro koncentraci 194,5 µmol.l-1): -6 % až +6 %
Bias pro skupiny, pocházející od stejného výrobce:
|
Výrobce |
Počet skupin |
Bias [%] |
|
Ortho Vitros |
5 |
11 až 22 |
|
Beckman |
11 |
6 až 18 |
|
Roche |
20 |
-7 až 10 |
Vliv měřicích systémů na bias, získaný analýzami 3 CRMs tří různých koncentrací podle studie francouzských autorů
Organizace: Creatinine Working Group SFBC (Societé Francaise de Biologie Clinique)
Závislost velikosti bias na metodické skupině je: -10 až +60 % (!!!)
Při použití „standardizované“ kalibrace: Téměř žádná změna proti komerční (IVD) kalibraci výrobce.
Bias v porovnávacím experimentu IMEP-17 (IRMM Geel 2002)
CRM: Dva materiály s certifikovanými hodnotami (metodou ID-LC-MS) 74,6 µmol.l-1 a 168,8 µmol.l-1 kreatininu
Bias pro vzorek 1 (74,6 µmol.l-1): -10 % až +30 %
Bias pro vzorek 2 (168,8 µmol.l-1): -10 % až +10 %
Doporučení laboratorní pracovní skupiny pro zlepšení výsledků měření kreatininu, vypracované pro Národní edukační program ledvinových onemocnění [13]
Pro detekci CHD (chronic kidney disease) jsou všechny způsoby její detekce nejisté u pacientů s hodnotou kreatininu pod 133 µmol.l-1. I při kompensaci o 21 µmol.l-1 poskytuje Jaffého metoda asi u 50 % pacientů nespolehlivé výsledky hodnot glomerulární filtrace (při použití výpočtu MDRD) pro ty, jejichž výsledek měření kreatininu je pod hodnotou 155 µmol.l-1.
Závěr
Přes standardizační úsilí a navzdory závazkům výrobců IVD zajišťovat návaznost výsledků měření na referenční materiály a metody vyššího metrologického řádu není v řadě případů dosaženo dostatečné a potřebné redukce hodnot bias a to i u základních analytů stanovovaných v klinických laboratořích již desítky let.
4.3.2. Stanovení TSH
Program CAP USA
Materiály:
QCM nativní: zmrazené směsi lidských sér (k dosažení maxima matriční přiměřenosti)
QCM lyofilizovaný: používaný v rutinním pravidelném programu EHK
Počet výrobců v souladu s IVD: 9
Stejnorodé skupiny: (výrobce + přístroj): 17
Intervaly bias pro všechny skupiny:
QCM nativní: -13,4 až +21,0 %
QCM lyofilizované (EHK): -12,6 % až +21,7 %
Absolutní bias (v mU.l-1) stejnorodých skupin čtyř hlavních výrobců:
Materiál: QCM EHK lyofilizovaný
|
Výrobce |
Absolutní bias [mU.l-1] |
|
Výrobce A |
0,28 až 0,32 |
|
Výrobce B |
0,14 až 0,40 |
|
Výrobce C |
0,08 až 0,22 |
|
Výrobce J |
0,15 až 0,52 |
|
Všechny skupiny |
0,14 až 0,52 |
Závěr
Stejně jako při stanovení kreatininu nevede ani zde standardizace a ani použití Směrnice IVD zatím ještě k žádoucímu a z hlediska klinické interpretace potřebnému stupni srovnatelnosti výsledků měření. Na druhé straně není zatím žádné jiné alternativy. TSH není na rozdíl od kreatininu v chemickém pojetí analytem, ale směsnou substancí.
4.3.3. Stanovení PSA
Biologické materiály:
Krevní séra pacientů, n = 312 (pacienti s CaP), n = 282 (pacienti bez průkazu CaP).
Materiál: séra pacientů. 312 od pacientů s CaP a 282 od pacientů bez průkazu CaP
Analytické měřicí systémy: Beckman Coulter - Access, Abbott - AxSYM, DPC - Immulite 2000, Roche - Elecsys 2010, Bayer- Advia Centaur.
Pracovní kalibrátor: Všichni výrobci mají kalibraci se zajištěnou návazností na mezinárodní CRM (pufrovaná směs 90 % PSA-ACT + 10 % fPSA) [14].
Stanovení tPSA
Tabulka mediánů tPSA v µg.l-1:
|
Popis |
Elecsys |
Access |
AxSYM |
Centaur |
Immulite |
|
Vše |
5,48 |
5,14 |
4,60 |
4,81 |
5,70 |
|
Bez CaP |
3,90 |
3,82 |
3,21 |
3,28 |
4,16 |
|
CaP |
6,19 |
6,17 |
5,46 |
5,29 |
6,84 |
Určení bias: Hodnota tPSA pro Access položena za hodnotu 100 %. Pak kolísají výsledky měření tPSA v intervalu 87 % až 115 % (nejnižší hodnoty tPSA pro AxSYM a nejvyšší hodnota tPSA pro Immulite). Celkový rozsah bias je B = 28 %.
Příčiny bias: Matriční rozdíly mezi CRM (pufr) a reálnými biologickými vzorky s obsahem proteinů (rozdílný poměr f/t PSA; PSA-ACT vykazuje vyšší imunoreaktivitu při stejném množství než fPSA [15].
Stanovení fPSA
Tabulka mediánů fPSA v %:
|
Popis |
Elecsys |
Access |
AxSYM |
Centaur |
Immulite |
|
Vše |
11,4 |
13,8 |
14,5 |
17,9 |
17,9 |
|
Bez CaP |
16,0 |
17,7 |
18,9 |
23,7 |
23,4 |
|
CaP |
8,7 |
10,9 |
11,1 |
13,9 |
13,9 |
Hodnota bias pro Access položena za 100 %. Pak bias:
|
Analytický systém |
Bias [%] |
|
AxSYM |
20,9 |
|
Centaur |
121 (!) |
|
Immulite |
-22,6 |
|
Elecsys |
-6,7 |
Výsledky EHK pro stanovení tPSA a fPSA
Kontrolní vzorky: Čtyři ze společného programu EHK RIfB DGKL Bonn a SEKK Pardubice (z kontrolních cyklů TM1/05 A, TM1/05 B, TM3/05 B, TM4/05 A)
Stanovení PSA: Hodnota pSA pro Access je položena za 100 %
|
Analytický systém |
Naměřené hodnoty [%] |
Průměr (SD) [%] |
|
AxSYM |
65, 64, 65, 66 |
65 (0,8) |
|
Architect |
79, 77, 72, 77 |
76 (3,0) |
|
Bayer |
79, 80, 78, 80 |
79 (1,0) |
|
Immulite |
102, 95, 96, 97 |
99 (3,1) |
|
Elecsys |
99, 102, 97, 97 |
99 (2,4) |
|
Rozsah bias v % |
34 |
|
Výsledky stanovení a jeho rozdíly odpovídají očekávání.
Stanovení fPSA: Dramatické diference při stanovení fPSA.
|
Analytický systém |
Průměr [%] |
SD [%] |
|
AxSYM |
99,6 |
6,0 |
|
Architect |
91,7 |
3,4 |
|
Bayer |
86,7 |
4,1 |
|
Immulite |
63,2 |
2,4 |
|
Access |
85,2 |
4,35 |
|
Elecsys |
60 |
2,4 |
|
Rozsah bias v % |
34 |
|
Svědčí jednoznačně pro velmi rozdílnou úroveň imunoreaktivity u fPSA!
Závěr: Rozdíly mezi výsledky měření získanými analytickými měřícími systémy jsou z největší části způsobeny matriční nepřiměřeností mezinárodního certifikovaného referenčního materiálu. Dalším zdrojem diferencí je rozdílná imunoreaktivita protilátek proti fPSA. Kontrolní materiály používané obecně v EHK mívají nepřiměřené vysoký podíl fPSA, který se v nativních biologických vzorcích nevyskytuje.
4.3.4. Návaznost výsledků měření katalytické koncentrace enzymů
Experiment EC4
Biologické materiály:
Směs zmrazených lidských sér (zaručujících vysokou komutabilitu)
Analytické měřicí systémy globálních výrobců: Abbott, Beckman, DADE, Olympus, Ortho, Roche
Pracovní kalibrátory: kalibrátory výše uvedených výrobců
Publikováno v Clinica Chimica Acta [18]
Návaznost posouzena srovnáním s hodnotou bias odvozenou z biologických proměnlivostí.
Referenční hodnoty získány ve 3 akreditovaných referenčních laboratořích pomocí referenčních měřicích postupů IFCC.
|
Enzym |
Podíl vyhovujících výsledků |
Výrobci |
|
ALT |
> 95 % |
DADE, Olympus, Ortho, Roche |
|
94 % |
Abbott |
|
|
89 % |
Beckman |
|
|
AST |
95 % |
DADE |
|
88 % |
Olympus |
|
|
68 % |
Ortho |
|
|
52 % |
Roche |
|
|
50 % |
Abbott |
|
|
48 % |
Beckman |
|
|
CK |
> 95 % |
Abbott, Beckman, Roche |
|
85 % |
Olympus |
|
|
81 % |
Ortho |
|
|
73 % |
DADE |
|
|
gGT |
98 % |
Olympus |
|
92 % |
Roche |
|
|
90 % |
Abbott |
|
|
79 % |
Beckman |
|
|
73 % |
DADE |
|
|
60 % |
Ortho |
|
|
LD |
81 % |
Roche |
|
73 % |
Olympus |
|
|
< 40 % |
Abbott, Beckman, DADE, Ortho |
|
|
aAMS |
> 95 % |
Roche |
|
50 % |
Beckman, Olympus |
|
|
bez návaznosti |
Abbott, DADE, Ortho |
Závěr:
Principy stanovení nejsou u všech výrobců v potřebné shodě s referenčními metodami IFCC. Měření katalytických koncentrací enzymů je rovněž zatíženo významnými kalibračními chybami – kalibrátory různých výrobců nejsou metrologicky návazné na referenci IFCC a tudíž ani vzájemně srovnatelné.
Další informace
Bedřich Friedecký, Josef Kratochvíla, Zdeněk Kubíček
recenze Zbyněk Plzák