Existuje celá řada molekul, které mohou být ionizovány po nanesení na příslušnou matrici. Některé z těchto matric, např. 2,5-dihydroxybenzoová kyselina (DHB), jsou vhodné k širokému použití. Některé příklady jsou uvedeny v tabulce:
|
Matrice |
Zkratka |
Molekulová hmotnost |
Rozpouštědlo |
Aplikace |
|
3-amino-4-hydroxybenzoová kyselina |
- |
153,1 |
MeCN/H2O |
Cukry |
|
2,5-dihydroxybenzoová kyselina |
DHB |
154,1 |
MeCN, aceton |
Obecné, zvláště cukry |
|
DHB/2-hydroxy-5-methoxybenzová kyselina |
Super-DHB |
154,1/168,1 |
MeCN, aceton |
Peptidy, cukry |
|
DHB/1-hydroxy-iso-chinolin |
DHB/HIQ |
154,1/145,2 |
MeCN/H2O |
Cukry |
|
2-(4´-hydroxy-fenylazo)benzoová kyselina |
HABA |
242,2 |
aceton |
Polymery, cukry |
|
Kyselina skořicová |
- |
148,1 |
MeCN/H2O |
Univerzální |
|
Kyselina nikotinová |
- |
123,1 |
H2O |
Proteiny |
|
Kyselina sinapová (3,5-dimethoxy-4-hydroxy)skořicová kyselina |
- |
224,2 |
MeCN/H2O |
Proteiny, polymery |
|
Alfa-kyano-4-hydroxyskořicová kyselina |
4-HCCA |
189,2 |
MeCN/H2O, aceton |
Peptidy, lipidy |
|
2,4,6-trihydroxyacetofenon |
THAP |
167,2 |
etanol |
Cukry, zejména s obsahem sialové kyseliny, oligonukleotidy |
|
Arabinoosazon |
- |
328,4 |
Etanol, metanol |
Cukry |
S vývojem techniky MALDI se profilovaly i jednotlivé typy matric vhodných pro určitý okruh analyzovaných látek. Pro uspokojivé použití by matrice měla splňovat následující vlastnosti:
· Schopnost tvořit krystaly začleňující analyt do své krystalové mřížky nebo schopnost pojmout analyt, je-li matricí kapalina
· Schopnost absorbovat energii laseru
· Dostatečnou těkavost k převodu do hmotového spektrometru
· Vhodné chemické vlastnosti pro ionizaci
Většinu dříve používaných matric tvořily malé organické kyseliny schopné protonovat proteiny a aminokyseliny, které byly cílem použití této techniky. V současnosti je používána i řada neutrálních a dokonce i bazických sloučenin. Smíchání matrice se vzorkem může nastat před nanesením na nosič, častěji jsou však roztoky vzorku a matrice naneseny na podložku nezávisle a teprve zde dochází k promíchání. U řady vzorků dochází k vysušení vlivem okolních podmínek, sušení může být urychleno teplem, proudem vzduchu nebo inertního plynu, nebo umístěním podložky do exsikátoru. Tyto postupy vyhovují většině analyzovaných sloučenin, mají však také řadu variant zohledňujících vlastnosti analytu a směřujících zejména k maximální síle a kvalitě signálu. Může se například stát, že malé krystaly matrice z originální vrstvy mohou katalyzovat vznik dalších malých krystalů ve finálním spotu.
Některé matrice (např. 2,5-dihydroxybenzoová kyselina, DHB) produkují jen malé množství velkých krystalů, obvykle na periferii daného terčíku směřujících dovnitř, takže při použití instrumentace bez vybavení kamerou může být složité nalézt vhodný bod k získání signálu.
Někdy mohou být použita aditiva tvořící iontový pár se vzorkem nebo s nečistotou matrice (např. použití kyseliny citronové k vazbě interferujících kationtů v hydroxybenzofenonové matrici).
Čistota vzorku je důležitým faktorem pro získání kvalitního MALDI spektra. Kontaminanty jako jsou soli a pufry inhibují krystalizaci vzorku na nosiči. Mezi mikročistící postupy patří kapková dialýza, při které se kapička vzorku (okolo 1 µl) čistí přes dialyzační membránu plovoucí na povrchu vody. Variantami tohoto postupu může být použití membrány absorbující hydrofóbní sloučeniny, nebo použití iontoměničové pryskyřice, či fáze C18 (mikrokolonka jako součást pipetovací špičky). Jiné odsolovací postupy postupy využívají přímo iontoměnič jako součást MALDI terčíku, částečky jsou mechanicky odstraněny ještě před vstupem do hmotového spektrometru.
Literatura:
Jaroslava Vávrová