Benzodiazepiny v moči (Abbott, AxSym)

OSN-SAbstraktOSN-E

Souprava AxSym Benzodiazepines, kat. č. 3B30-20 umožňuje semi-kvantitativní stanovení benzodiazepinů a jejich metabolitů v moči principem FPIA (Fluorescence Polarization Immunoassay).

 

OSN-SSeznam souvisejících dokumentůOSN-E

Benzodiazepiny

Benzodiazepiny v plazmě

Benzodiazepiny (průkaz) v moči

 

OSN-SKódy, názvy, definice a terminologieOSN-E

Chemické vzorce:

Příklady sumárních vzorců a molekulových hmotností:

    Diazepam                                               C₁₆H₁₃ClN₂O      - 270,7

    Nordiazepam (desmethyldiazepam)      C₁₅H₁₁ClN₂O      - 284,8

    Oxazepam                                             C₁₅H₁₁ClN₂O₂     - 300,8

Příklady strukturních vzorců:

 

        

 

            Diazepam                                Nordiazepam                              Oxazepam

 

Příklady komerčních názvů :

Ansilan, Antelepsin, Apaurin, Doral, Diazepam, Halcion, Klonopin, Lexaurin, Librium, Loram, Nitrazepam, Oxazepam, Rivotril, Rohypnol, Rusedal, Seduxen, Stesolid, Serax, Tavor, Valium, Xanax

 

Národní číselník laboratorních položek:

08229 Benzodiazepiny (U; látková konc. [ µmol/l] * )

11525 Benzodiazepiny (U; přítomnost [ -] * )

Laboratorní informační systém STAPRO:

Globální kód: 0954 Benzodiazepiny v moči

 

Seznam zdravotních výkonů VZP:

99151 Psychotropní látky jednotlivě.                                         (427 bodů)

92135 Drogy a léčiva – cílený imunochemický záchyt –STAT  (492 bodů)

92133 Drogy a léčiva – cílený imunochemický záchyt.             (406 bodů)

 

Benzodiazepines je diagnostický test určený pro semi-kvantitativní měření koncentrace benzodiazepinů v moči na analyzátoru Abbott AxSym.

Výrobcem setu je Abbott Laboratories, Diagnostics Division, Abbott Park, IL 60064, USA. 

Dodavatelem setu je Abbott Laboratories, s. r. o. , Diagnostics Division, Hadovka Office Park, Evropská 2590/33d, 160 00 Praha 6, tel. 267 292 111

Katalogové číslo setu je 3B30-20.

 

OSN-SPrincip a metoda postupuOSN-E

Při ozařování zářením určité vlnové délky vydávají některé látky záření větších vlnových délek, tzv. fluorescenční záření. Předpokladem ke vzniku fluorescence je absorpce záření, vedoucí k excitaci molekul, tj. přechodu do nestabilního excitovaného stavu. Při návratu zpět do základního stavu se část energie ztratí ve formě tepla, část se vyzáří právě ve formě fluorescence.

Analyzátor AxSym využívá technologii FPIA (Fluorescence Polarization Immunoassays), ve které se kombinují dva principy:

- Kompetitivní reakce: Stanovovaný analyt - benzodiazepiny ze vzorku soutěží s v reagencii dodávaným analytem - benzodiazepinem značeným fluoresceinem  o vazebná místa na protilátce. Úspěšnost navázání je úměrná jejich relativní koncentraci. Při vysoké koncentraci analytu ve vzorku zůstane nenavázaný značený analyt, při nízké koncentraci analytu ve vzorku se naopak značený analyt převážně naváže. 

- Fluorescenční polarizace: Přístroj měří intenzitu fluorescenčního záření emitovaného fluoresceinem jen v jedné polarizované rovině. Pokud zůstane značený analyt nenavázaný, jeho malá molekula rychle rotuje a fluorescenční záření se v měřené polarizované rovině projeví jen málo. Pokud se značený analyt naváže na velkou, jen pomalu rotující molekulu protilátky, je intenzita fluorescenčního záření v měřené polarizované rovině velká.  

Měřená intenzita polarizovaného záření je tedy nepřímo úměrná koncentraci analytu ve vzorku.

 

OSN-SMísto provádění postupuOSN-E

Laboratoř vybavená analyzátorem Abbott AxSym.

 

OSN-SBezpečnostní aspekty a podmínky prostředíOSN-E

Při stanovení je nutné, vedle obecných zásad bezpečnosti práce, viz Směrnice o bezpečnosti práce zachovávat především zásady bezpečné práce s potenciálně infekčním materiálem. Viz:

Směrnice pro práci s biologickým materiálem

Směrnice pro likvidaci biologického materiálu

Dezinfekce, sterilizace

Reagencie jsou konzervovány přídavkem jedovatého azidu sodného. Mimo negativní zdravotní působení je azid sodný rizikový proto, že může reagovat s olovem nebo mědí za vzniku explozivních azidů.

Čistící roztok (TEAH) může iritovat kůži a oči. Při kontaktu bezprostředně opláchnout vodou.

R22  Škodlivé při požití

R32  Při kontaktu s kyselinami vzniká velmi toxický plyn

S2    Držet z dosahu dětí

S13  Držet mimo potraviny a nápoje

S36  Používat vhodný ochranný oděv

S46  Při požití okamžitě vyhledat lékařskou pomoc

 

OSN-SFáze před vyšetřením (příprava pacienta)OSN-E

   Benzodiazepiny představují skupinu často používaných léků tlumících činnost CNS vazbou na GABA (gama-aminobutyric acid) receptory. Jsou často aplikovány jako anxiolytika, sedativa, myorelaxancia, antikonvulziva, preanestetika, antiepileptika apod. Při dlouhodobém a nadměrném užívání se může vyskytnout návyk a závislost  spojená s nutností zvyšování  aplikovaných dávek.  Po náhlém vysazení léčby se mohou objevit i akutní abstinenční příznaky (křeče, anorexie, svalová ochablost, zvracení, průjem). Riziko vzniku závislosti a tím i zneužívání je ale u benzodiazepinů relativně malé. Vzhledem k masovému používání jsou však relativně časté intoxikace způsobené předávkováním a potencované někdy současným působením jiných léků nebo alkoholu. Otrava se projevuje ospalostí, komolením řeči, poruchou koordinace a případně až komatem. Vážnější poruchy respiračního a kardiálního systému se objevují jen vzácně.

   Benzodiazepiny se většinou aplikují orálně. Lipofilní benzodiazepiny (např. diazepam, flurazepam) se absorbují rychle, peak v séru se objeví již za méně než půl hodiny. Jiné, méně lipofilní (oxazepam), se absorbují pomaleji s maximální koncentrací v séru až za 2-3 hodiny po aplikaci. Po absorpci v GIT jsou benzodiazepiny rychle distribuovány do CNS. Následuje již mnohem pomalejší redistribuce z CNS do tukových tkání a svalů. Rychlost této redistribuce určuje (spolu s účinností jaterní metabolizace), jak dlouho přetrvávají účinky podaného léku (např. u diazepamu je t_1/2  30-56 hodin, u oxazepamu jen 5-15 hodin).

t_1/2  částečně určuje, pro jakou klinickou aplikaci se konkrétní typ benzodiazepinu použije. Pro preanestetické uklidnění se volí krátký, pro léčbu úzkosti středné dlouhý a jako antikonvulzívum dlouhý t_1/2.  

   Z benzodiazepinů  vzniká v játrech oxidací a konjugací řada často farmakologicky aktivních metabolitů, které se nakonec vylučují močí převážně ve formě glukuronidů.

   Benzodiazepiny mohou být kvantifikovány v séru např. metodou HPLC, ale tento údaj není příliš významný, protože koncentrace v séru nekoreluje s závažností intoxikace. Velmi užitečný a často indikovaný je ale imunochemický screeningový test umožňující semi-kvantitativní průkaz přítomnosti významného množství benzodiazepinů či jejich metabolitů v séru nebo v moči u pacientů s neznámou příčinou akutního utlumení CNS.

 

OSN-SOdběr primárního vzorku (druh, nádobka, transport)OSN-E

Vzorky močí se musí odebírat do čistých, dříve nepoužitých nádobek. Pro semi-kvantitativní analýzu benzodiazepinů je zapotřebí odebrat minimálně 2-3 ml moče, aby bylo případně možné analýzu zopakovat. Ihned po odběru je nutné vzorky řádně označit, aby se předešlo případné záměně vzorků. 

 

Pro transport i pro uchovávání před stanovením je třeba vzorky ochladit v lednici na 2-8 °C a eventuálně konzervovat přídavkem 0,1% azidu sodného, nebo 0,1% kyseliny borité, nebo 0,013% fluoridu sodného. Pokud by se nestihlo analýzu realizovat do 48 hodin po odběru, je nutné vzorky moče uchovávat v mrazáku při – 20 °C.

 

OSN-SOmezení (interference a zkřížené reakce)OSN-E

- Set AxSym Benzodiazepines poskytuje pouze předběžné semi-kvantitativní výsledky, které je u pozitivního nálezu třeba  potvrdit nezávislou metodou založenou nejlépe na principu GC/MS.

- Výsledek stanovení benzodiazepinů musí být porovnáván s všemi dostupnými klinickými informacemi i s výsledky všech ostatních provedených vyšetření.

- Koncentrace léků a jejich metabolitů detekovaných v moči nekoreluje s hladinou léků v krvi ani se stupněm negativních účinků na organismus. Je to pouze důkaz o dřívější expozici organismu benzodiazepinům.

- U některých vzorků močí se může vyskytnout překročení povolené základní hodnoty fluorescence (chybové hlášení 1065 Invalid test results, background intensity too high). Tento problém nelze řešit opakováním analýzy po naředění vzorku, ale musí se aplikovat jiná metoda stanovení.

 

OSN-SManipulace se vzorkyOSN-E

Před analýzou se musí vzorky (rozmrazit) vytemperovat na teplotu laboratoře a zkontrolovat, zda ve vzorku napipetovaném ( minimálně 150 µl pro rutinní + 89 µl pro STAT analýzu) do vzorkové nádobky nejsou bubliny, které je případně nutné odstranit. Při pipetování apod. se musí věnovat maximální pozornost zabránění eventuální kontaminace vzorků navzájem, tj. na každý vzorek použít novou špičku.

 

OSN-SPřístroje a pomůckyOSN-E

Analyzátor Abbott AxSym

Pipety

 

OSN-SReagencieOSN-E

Reagencie obsažené v reagenční soupravě Benzodiazepines No. 3B30-20 postačují pro semi-kvantitativní stanovení benzodiazepinů v 100 vzorcích močí.

 V soupravě jsou tři lahvičky:

Reagenční lahvička čís. 1: 4,6 ml < 1% ovčí protilátky proti benzodiazepinům v pufru s proteinovým stabilizátorem a konzervačním činidlem (azid sodný)

Reagenční lahvička čís. 2: 4,4 ml přípravného roztoku v pufru s proteinovým stabilizátorem a konzervačním činidlem (azid sodný)

Reagenční lahvička čís. 3: 5,3 ml < 0,01% benzodiazepinů značených fluoresceinem v pufru se smáčedlem a proteinovým stabilizátorem. Jako konzervační činidlo je opět azid sodný.

 

Reagencie 1, 2 , 3 musí být uchovávány při 2-8 °C. Znamená to, že reagenční soupravy je zapotřebí vyjmout z reagenčního kruhu a umístit zpět do lednice vždy bezprostředně po ukončení analýzy.

V nechlazeném reagenčním kruhu analyzátoru mohou  být reagenční soupravy maximálně po dobu 336 kumulativních hodin. Po této době a v době po exspiraci setu by se již reagencie neměly používat.

 

Výrobce nedoporučuje míchání reagencií z různých výrobních šarží.

 

Ostatní potřebné reagencie:

Čistící roztok (AxSym Probe Cleaning Solution No. 9A35-05): 2 ks lahví á 220 ml 2% tetraethylamonium hydroxidu - TEAH . Roztok je stabilní v uzavřených lahvích při 15-30 °C.

Ředící roztok 4 (Line Diluent No. 8A46) : 1 láhev 10 litrů 0,1 M fosfátového pufru s azidem sodným jako antimikrobiálním konzervačním činidlem. Roztok je stabilní v uzavřených lahvích při 15-30 °C.

 

OSN-SSpotřební materiálOSN-E

Reakční nádobky dodávané s reagenční soupravou.

Vzorkové nádobky No. 8A76-01.

Špičky k automatické pipetě 20-200 µl.

Papír do tiskárny.

 

OSN-SPříprava k činnostiOSN-E

V analyzátoru musí být nainstalován software metody Benzodiazepines Assay z diskety No. 3D54-02 nebo vyšší (336 hodin stability reagencií v nechlazeném reagenčním kruhu analyzátoru), nebo No. 9B71-02 či vyšší (112 hodin stability reagencií v nechlazeném reagenčním kruhu analyzátoru).

Parametry metody viz odstavec Appendixy.

Dále musí být změřená kalibrace (buď celá 6 bodová, nebo zkrácená – master 2 bodová) a vzápětí kontrolní materiály.

Do přípravy analyzátoru ještě náleží prověření stavu pomocných reagencií a kontrola zaplnění prostorů pro odpad.

  

OSN-SPracovní postupOSN-E

Postup obsluhy:

Pokud je při zapnutém a vytemperovaném analyzátoru zkontrolovaná kalibrace (viz odstavec Kalibrace), výsledky kontroly kvality (viz odstavec Řízení jakosti), stav pomocných reagencií a zaplnění odpadu (viz Inventář), spočívá rutinní provedení analýzy v následujících činnostech:

- zadání vzorků a v nich požadovaných metod (Order list) – zadání lze provést lokálně či PC přenosem

- vložení vzorkových segmentů s potřebným množstvím vzorků v každé nádobce

- vložení reagenčních souprav

- odstartování analýzy (RUN)

- sledování průběhu analýzy (Order status) a případné řešení hlášených závad

- vytištění (uvolnění výsledků) (Results)

- uložení reagenčních souprav do lednice

 

Kroky probíhající během analýzy FPIA v analyzátoru AxSym:

1. Ve vzorkovém centru se vzorkovou jehlou napipetuje vzorek do příslušné jamky v reakční nádobce (Reaction Vessel) a dále všechny reagencie obsažené v reagenční soupravě.

2. V ředící jamce reakční nádobky se smíchá vzorek a ředící roztok č. 4. Reakční nádobka je ihned transportována do procesního centra, kde se již veškeré další pipetování realizuje procesní jehlou.

3. Do kyvety reakční nádobky se pipetuje zředěný vzorek, reagencie 1 (protilátka v pufru), reagencie 2 (přípravný roztok a pufr) a ředící roztok č.4. Vše se inkubuje na reakční teplotu. Potom se  provede první měření intenzity fluorescenčního záření, naměřená hodnota odpovídá blanku.

4. Do kyvety reakční nádobky se přidají další části zředěného vzorku, reagencií 1 a 2 a dále reagencie 3 (fluoresceinem značené benzodiazepiny).

5. Během inkubace proběhne kompetitivní reakce a poté se provede druhé měření intenzity polarizovaného záření. Intenzita je nepřímo úměrná koncentraci analytu (benzodiazepinu) ve vzorku.

3. Podle platné kalibrace přístroj vyhodnotí koncentraci benzodiazepinu v analyzovaném vzorku moče.

 

OSN-SStručný popis postupuOSN-E

- zadání vzorků a v nich požadovaných metod (Order list)

- vložení vzorkových segmentů s potřebným množstvím vzorků v každé vzorkové nádobce

- vložení reagenčních souprav

- odstartování analýzy (RUN)

- sledování průběhu analýzy (Order status) a případné řešení hlášených závad

- vytištění (uvolnění výsledků) (Results)

- uložení reagenčních souprav do lednice

 

OSN-SKalibrace a návaznostOSN-E

Přesný postup realizování kalibrací je uveden v SOPT  Abbott AxSYM a v kapitole 6 manuálu.

Lze provést buď standardní 6 bodovou kalibraci nebo zkrácenou 2 bodovou (master) kalibraci:

 

Standardní kalibrace:

X SYSTEMS ^Ò Benzodiazepines Calibrators No. 9674-02, celkem 6 lahviček (1x 4 ml A, 5x 2,5 ml B-F) obsahujících nordiazepam v matrici lidské moče konzervované azidem sodným, v následujících koncentracích:

 

Lahvička	Koncentrace nordiazepamu ( nmol/l)	Koncentrace nordiazepamu ( µg/l)
A	0	0
B	738	200
C	1476	400
D	2953	800
E	4429	1200
F	8859	2400

 

Bezprostředně po změření standardní kalibrace je doporučeno proměřit všechny hladiny kontrolních materiálů.

 

Master kalibrace:

AxSYM Benzodiazepines Master Calibrators No. 3B30-30, celkem 2 lahvičky á 4 ml,  obsahujících nordiazepam v matrici lidské moče konzervované azidem sodným, v následujících koncentracích:

 

Lahvička	Koncentrace nordiazepamu ( nmol/l)	Koncentrace nordiazepamu ( µg/l)
1	0	0
2	738	200

 

Pokud je u metody možné použít zkrácenou kalibraci, je v krabičce reagenční soupravy vložena kartička s čárovým kódem obsahujícím informace o křivce pro zkrácenou kalibraci pro danou výrobní šarži reagencií.

Při přechodu na novou šarži reagencií se nejdříve musí do systému pomocí čárového kódu vložit informace o zkrácené kalibrační křivce (Stored results - Calibration Review - F4 New lot - F4 Scan curve - F6 Save) a potom proměřit (v dubletu) oba master kalibrátory (Orderlist – F4 Cal - vybrat metodu - vybrat master kalibraci - F6 Add - F1 Exit). Bezprostředně potom je doporučeno změřit všechny hladiny kontrolních materiálů.

 

Jakmile je kalibrace proměřena, akceptována  a uložena, mohou se testovat vzorky bez dalšího rekalibrování až do té doby, než:

- se začnou používat reagencie z jiné výrobní šarže

- se vyskytnou výsledky kontrolních vzorků mimo přípustné rozmezí

- než se instalují jiné parametry metody 

- se provede významná údržba systému spojená s případnou výměnou nějaké součásti

 

Bezprostředně po rekalibraci je vždy doporučeno proměřit všechny hladiny kontrolních materiálů.

 

Kalibrátory musí být uchovávány při 2- 8 °C. Znamená to, že je zapotřebí umístit je zpět do lednice vždy bezprostředně po napipetování potřebného množství do jamky reagenční nádobky.

 

 

 OSN-SCharakteristika spolehlivostiOSN-E

Mez detekce (průměr + 3 směrodatné odchylky slepého vzorku, tj. nejnižší koncentrace odlišitelná od nulové hladiny):

při cut off  200 µg/l:  148 nmol/l  (40 µg/l)

Pracovní rozsah: do 8859 nmol/l  (2400 µg/l) při semi-kvantitativním stanovení.

Interference:

S výsledky stanovení může interferovat přítomnost detergentů ve vzorku.

Chlornan sodný jako silné oxidační činidlo může způsobit oxidaci některých analytů a způsobit tak falešné snížení výsledku.

Výrobci dále testovali vliv řady běžných látek na výsledek testu. V tabulce jsou uvedeny koncentrace, při kterých způsobená chyba nepřekročila 10%:

 

Látka	Koncentrace                                                           (g/l)
Aceton	10
Kyselina askorbová	15
Bilirubin	2,5
Kreatinin	5
Etanol	10
Glukóza	20
Hemoglobin	1,15
Kyselina šťavelová	1
Riboflavin	0,075
Chlorid sodný	60
Celkové proteiny	0,5
Urea	60

 

Specificita:

Výrobci prověřili případný vliv přídavku celé řady běžně užívaných benzodiazepinů a jejich metabolitů ke vzorku. V tabulce jsou uvedeny koncentrace, které vyvolaly křížovou reakci vyšší než mez detekce:

 

Látka	Koncentrace (µg/l)
Alprazolam	200
Bromazepam	200
Chlordiazepoxid	800
Clobazepam	1000
Clonazepam	200
Demoxepam	400
Desalkyflurazepam	200
Diazepam	200
Estazolam	100
Flunitrazepam	200
Flurazepam	200
Lorazepam	200
Lormetazepam	1000
Medazepam	200
Nimetazepam	200
Norchlordiazepoxid	800
Oxazepam	200
Prazepam	200
Temazepam	200
Triazolam	200

 

Výrobci dále testovali křížovou reaktivitu (cross-reactivity) strukturně příbuzných látek a metabolitů i jiných léků indikovaných jako alternativa k benzodiazepinům. V tabulce jsou uvedeny příklady substancí a koncentrace, které vyvolaly křížovou reakci vyšší než mez detekce:

 

Látka	Testovaná koncentrace      (µg/l)
Benzotropin	1000
Butyrophenon	1000
Kokain	1000
Indomethacin	1000
Ketoprofen	100
Methadon	1000
Methotrimeprazin	1000
Phendimetrazin	1000

 

V další tabulce jsou uvedeny příklady látek, které dávaly negativní křížovou reakci:

Látka	Látka
Acetaminophen (Paracetamol)	Erythromycin
Kyselina acetylsalicylová	Estriol
Amitriptylin	Hydrokodon
Amobarbital	Ibuprofen
Amoxicilin	Katamin
Ampicilin	Melanin
Benzokain	Morphin
Kyselina benzoová	Nikotin
Kofein	Penicilin G
Chloramfenikol	Phencyklidin (PCP)
Cholesterol	Phenobarbital
Kodein	Sekobarbital
Digoxin	Serotonin
Dihydrokodein	Tetracyklin
Ephedrin	Tetrahydrokanabinoidy
Epinephrin	Theofylin

 

Přesnost:  Přesnost výrobci setu prověřili na třech směsných vzorcích močí, které byly analyzovány pomocí jedné šarže reagencií a stejné kalibrace vždy 2x denně po dobu 20 dnů.

 

SD = směrodatná odchylka      %VK = variační koeficient v %

Opakovatelnost                       (v sérii)				Reprodukovatelnost                       (v čase 20 dnů)
Moč (hladina)	Průměr   (µg/l)	SD  (µg/l)	%VK	Průměr   (µg/l)	SD   (µg/l)	%VK
Nízká     (300 µg/l)	315,19	7,63	2,42	315,19	7,95	2,52
Střední  (600 µg/l)	636,55	17,38	2,73	636,55	19,60	3,08
Vysoká (1000 µg/l)	962,78	33,41	3,47	962,78	34,95	3,63

 

Správnost:

Byla výrobci setu prověřena pomocí standardních přídavků a to jednak do moče, jednak do ředícího roztoku č. 4. Tyto dvě sady vzorků se stoupajícím obsahem nordiazepamu byly analyzovány běžným způsobem.

% výtěžnosti (recovery) = 100 x konc. v ředícím roztoku  / koncentrací v moči

 

Přídavek (µg/l)	Konc. v moči (µg/l)	Konc. v řed. r. 4 (µg/l)	% výtěžnost (recovery)
200	200,98	197,96	98,5
300	276,70	238,8	86,3
400	380,51	331,14	87,03
600	578,39	533,86	92,3
800	794,45	760,03	95,67
1000	1020,68	1038,29	101,73
1200	1158,00	1122,91	96,97
2400	2185,29	2183,56	99,92

 

Porovnání metod:

Dále byla správnost prověřena srovnáním výsledků setu AxSYM Benzodiazepines s výsledky získanými referenční metodou založenou na principu GC/MS:

Analýzy na AxSymu byly realizovány přímo v Abbott Laboratories, analýzy GC/MS realizovala referenční laboratoř. Shoda či rozdílné hodnocení nálezu (pozitivní-negativní) je závislé na nastavené hodnotě cut-off, tj. na hodnotě, nad kterou se u výsledku na AxSymu objeví označení pozitivity vzorku na přítomnost benzodiazepinů (TP = správně pozitivní, TN = správně negativní, FP = falešně pozitivní, FN = falešně negativní).

Celkem 93 vzorků močí obsahujících benzodiazepiny a jejich metabolity.

Cut-off GC/MS = 100 µg/l.

Cut-off  pro AxSym (µg/l)	AxSym pozitivní / GC/MS pozitivní	AxSym negativní / GC/MS pozitivní	%shody= (TP+TN) / (TP+FP+TN+FN)
100	93	0	100
200	81	12	87
400	61	32	66
800	31	62	33

 

OSN-SDokumentace, výpočty, zpracování dat a vydávání výsledkůOSN-E

Analyzátor AxSym vyhodnotí naměřenou fluorescenci vzorku podle platné kalibrace a určí koncentraci ve vzorku, která je nepřímo úměrná fluorescenci. 

Výsledek lze vytisknout na připojené tiskárně. Mimo to je možný automatický přenos výsledku do laboratorního informačního systému (například LIS STAPRO). Po analytické a lékařské kontrole je potom možný přenos výsledků prostřednictvím počítačové sítě až na příslušnou kliniku nebo oddělení.

 

Jestliže při měření dojde například k překročení kalibračního limitu, nebo k nějaké závažné chybě při analýze, objeví se na monitoru vedle výsledku příslušná značka (podrobnosti viz manuál analyzátoru).

 

Výsledky se při semi-kvantitativním stanovení vydávají v nmol/l , event. v µg/l . Předávají se (po splnění všech požadavků na stanovení a po tom, kdy výsledky projdou analytickou a lékařskou kontrolou) na analýzu požadující pracoviště buď v elektronické formě pomocí počítačové sítě, nebo po tisku v papírové formě spolu s vyznačením fyziologických hodnot, eventuálně s hvězdičkovým vyznačením jejich překročení.

Všechny výsledky se archivují v elektronické formě v laboratorním informačním systému a mimo to ještě v papírové formě v jednou denně vytištěné hlavní knize laboratoře.

 

Pozn.: Přepočet jednotek:  ng/ml = µg/l,    µg/l x 3,6911 = nmol/l

 

OSN-SReferenční, varovné nebo kritické hodnotyOSN-E

Hodnota cut-off se nastavuje v parametrech testu na řádcích 116 a 117.

Jako doporučená hodnota cut-off je výrobcem nastaveno 738 nmol/l, tj. 200 µg/l.    

Výsledky vyšší než cut-off jsou považovány za pozitivní a vydává se konkrétní nalezená hodnota a to až do nejvýše vydávaného výsledku, tj. do 8859 nmol/l (2400 µg/l). Při překročení se již vydává jen > 8859 nmol/l (> 2400 µg/l).

Případné výsledky nižší než cut-off jsou brány jako negativní a výsledek se vydává ve tvaru     < 738 nmol/l (< 200 µg/l).

 

OSN-SInterpretace výsledků, konzultační činnosti a hlášeníOSN-E

K hodnocení výsledků je třeba přistupovat velmi opatrně, protože výsledek může být ovlivněn celou řadou faktorů, jako je např. hustota analyzované moči apod.

Pro definitivní potvrzení případných pozitivních nálezů je nutné použít specifickou metodu založenou nejlépe na principu GC/MS.

Doba, po kterou se mohou benzodiazepiny detekovat v biologickém materiálu je extrémně variabilní a závisí na řadě faktorů:

-          na použitém typu (citlivosti) imunochemického semi-kvantitativního testu

-          na typu benzodiazepinu

-          na aplikované dávce

-          na akutním či chronickém užívání

   Dlouho působící benzodiazepiny (např. diazepam) se aplikují v relativně velkých dávkách, které mohou být detekovány řadu dnů, týdnů a při chronickém používání dokonce i měsíců. Krátkodobě působící benzodiazepiny (např. triazolam) se používají jen v malých dávkách a mohou být detekovány jen po dobu několika dní.

 

OSN-SŘízení kvalityOSN-E

Ke kontrole kvality jsou určeny kontrolní materiály X SYSTEMS Multiconstituent Controls No. 9687-12.

Každé balení obsahuje vždy dvě lahvičky á 4,5 ml pro každou z kontrolovaných hladin.

Koncentrace Nordiazepamu v matrici lidské moče, konzervované azidem sodným.
Lahvička	nmol/l	µg/l
L  (Low)   - nízká hladina	1107 (872-1342)	300 (236 – 364)
M (Medium) – střední hladina	2215 (1690 – 2739)	600 (458 – 742)
H (High) – vysoká hladina	3691 (2762 – 4620)	1000 (748 – 1252)

  

Stabilita:

Kontrolní materiály se nesmí zamražovat. V tom případě jsou při skladování v lednici (2 - 8 °C) kontroly stabilní až do doby exspirace vyznačené na obalu. Kontroly se odpipetují do vzorkové nádobky bezprostředně po vyjmutí z lednice a ihned se zase do lednice vrací a to za podmínky zabránění kontaminaci a pečlivého uzavírání lahviček.

 

Každá laboratoř by si měla určit vlastní frekvenci provádění kontrol. Podle zásad správné laboratorní praxe by to mělo být minimálně jednou denně během analýzy rutinních vzorků, vždy při objevení významného posunu výsledků a potom vždy po provedení kalibrace. Je doporučeno aby kontrola probíhala na dvou hladinách, jedna pod hodnotou cut-off a druhá nad cut-off.

Výsledky získávané při analýzách kontrolních materiálů se průběžně zaznamenávají do kontrolních regulačních diagramů. V regulačních diagramech jsou mimo průměrných hodnot kontrolního materiálu vyznačeny i varovné (průměr ± 2 x směrodatná odchylka) a regulační (průměr ± 3 x směrodatná odchylka) meze. Eventuální překročení těchto mezí (nebo i jen překročení některého z nastavených Westgaardových pravidel určených pro vyhodnocování regulačních diagramů) znamená, že se analýza musí pozastavit, 

metodu a postup stanovení je nutné prověřit a po odstranění eventuálně zjištěné závady analýzu zopakovat.

 

Součástí kontroly a řízení jakosti by měla být pravidelná účast na mezilaboratorních kontrolách kvality organizovaných ve vhodných intervalech například firmou SEKK.

 

OSN-SPoznámky, zdroje variabilityOSN-E

 

OSN-SJiné související informaceOSN-E

 

OSN-SLiteraturaOSN-E

-          Schutz, H.: Benzodiazepines. A handbook. New York: Springer Verlag, 1982, 1-16.

-          Kaplan, SA., Jack, ML.: Metabolism of the benzodiazepines: Phamacokinetic and pharmacodynamic considerations. In: Cosat, E., ed. The benzodiazepines from molecular biology to clinical practice. New York, Raven Press, 1983, 173-199.

-          Baselt, RC.: Urine drug screening by immunoassay: Interpretation of results. In: Baselt, RC.,ed. Advanced in analytical toxicology. Foster City, CA: Biomedical Publications, 1984, 1, 81-123.

 

OSN-SAppendixyOSN-E

Parametry testu Benzodiazepines:

(Obsluhou editovatelné parametry jsou označené symbolem >)

1 Celý název metody (anglicky) : Benzodiazepines_Urine

6 Zkrácený název metody: Benzos

11 Číslo metody: 533

12 Verze metody: 1

13 Verze kalibrace: 00

14 Metoda dostupná: > ON  /OFF

17 Princip: FPIA

18 Počet opakování měření standardů při celé kalibraci: > 2

19 Počet opakování měření standardů při zkrácené kalibraci > 2

21 Konc. kalibrátoru A: 0,00

22 Konc. kalibrátoru B: 200,00

23 Konc. kalibrátoru C: 400,00

24 Konc. kalibrátoru D: 800,00

25 Konc. kalibrátoru E: 1200,00

26 Konc. kalibrátoru F: 2400,00

27 Konc. kalibrátoru 1 v zkrácené kalibraci: 0,00

28 Konc. kalibrátoru 2 v zkrácené kalibraci: 200,00

43 Doporučené ředění vzorku > UNDILUTED

44 Doporučený typ kalibrace: > Standard Cal

45 Jednotky : > nmol/l (µg/l)

46 Počet desetinných míst> 2

75 Spodní hranice extrémního výsledku: > 40,00

76 Horní hranice extrémního výsledku: > 1000,00 

92 Horní hranice pro měření v neředěném vzorku: > 2400

116 Pozitivní hranice cut-off: > 200,00

117 Negativní hranice cut-off: > 200,00

 

OSN-SAutorské poznámkyOSN-E

 

OSN-SRecenze, schváleníOSN-E

Autor a spoluautoři: ing. Václav Senft

Recenze:

Vyjádření:

Revize: