Stanovení benzodiazepinů
Synonyma
Hlavní generické názvy jsou: Alprazolam, Bromazepam, Cinolazepam, Clobazam, Clonazepam, Clorazepate, Cloxazolam, Diazepam, Estazolam, Flunitrazepam, Flurazepam, Halazepam, Chlordiazepoxide, Ketazolam, Lorazepam, Lormetazepam, Loprazolam, Medazepam, Midazolam, Nitrazepam, Nordazepam, Oxazepam, Phenazepam, Pinazepam, Prazepam, Quazepam, Temazepam, Tetrazepam, Triazolam
Preanalytická fáze
Stanovení se provádí v plazmě, séru, moči. Stabilita
vzorku: 20 – 25 °C moč 1 týden (pro
heparinizovanou plazmu nebo sérum uvádí Roche 8 h), 4 – 8 °C moč 12 týdnů, ale
dle Roche jen 5 dnů (pro heparinizovanou plazmu nebo sérum uvádí Roche 2 dny) . Doporučené pH moče 3 – 11 (Roche 5 – 8). Vzorky by měly být
chráněny před světlem. Koncentrace benzodiazepinů je nižší u kuřáků než u
nekuřáků.
Poznámky k analytické metodě
Imunochemické postupy jsou nejběžnější. Používá se kompetitivní homogenní enzymová imunoanalýza EMIT (celková reprodukovatelnost CV moč 10 – 14 %; výtěžnost 81 – 96 %), CEDIA (falešná pozitivita asi 4 % výsledků vlivem β-glukuronidázy, pokud nebyla hydrolyzovaná) a fluorescenční homogenní polarizační technika FPIA (celková reprodukovatelnost CV sérum 2,0 – 5,4 % a moč 1,8 – 11,1 %; křížová reaktivita nepříbuzných látek je < 0,3 %) . Dalším postupem je inhibiční imunoanalýza na latexových částicích s turbidimetrickou detekcí, která může být i v kinetickém režimu.
Před detekcí plynovou chromatografií (detektor
elektronového záchytu nebo plameno-ionizační) je nutná extrakce alkalizovaného
vzorku.
HPLC analýza s fotometrickou detekcí při 254
nm rovněž vyžaduje extrakci alkalizovaného vzorku. Dává se ji přednost před
GLC, neboť podmínky na koloně jsou mírnější a nemůže docházet k tepelnému
rozkladu labilnějších benzodiazepinů. Nicméně GC-MS technika se používá jako
srovnávací metoda pro hodnocení ostatních postupů.
Přímá fluorimetrická detekce není dostatečně
specifická a fotometrie v UV oblasti je nejen málo specifická, ale také
málo citlivá metoda.
Pro kvalitativní důkaz v moči lze použít TLC (po
extrakci léku následuje fluorimetrický průkaz na silikagelu). Metoda je
nevhodná pro kvantitativní účely, protože fluorescenční denzitometr není běžně
dostupný a vývoj chromoforu je poměrně pomalý (45 – 60 min).
Bylo popsáno také použití diferenční pulzní
polarografie, ale metoda má nízkou specifičnost.
Interference
Výsledky stanovení benzodiazepinů
v séru jsou nižší u kuřáků.
Výsledky stanovení benzodiazepinů v moči při imunochemických analýzách zvyšuje přítomnost β-glukuronidázy a také podávání nefopamu nebo chlorazepátu (pro metodu EMIT).
Další informace
Postupy pro hodnocení aktivit enzymů
Postupy pro hodnocení koncentrací proteinů
Petr Štern, 2010-03-08