Stanovení C4 komplementu

Synonyma

složka C4 komplementu, složka C4c komplementu (pouze část C4), β₁E-globulin, β₁E-protein, C4 antigen, CO4_CAVPO (complement 4 Cavia porcellus).

Poznámka: někdy sem bývají nesprávně řazeny také CH50 a CH100 (procento lýzy buněk celého komplementu) – to odpovídá ale součtu C3 + C4 (správněji C1 až C9).

Preanalytická fáze

Odběr nalačno není nutný. Analýza se provádí v plazmě (koagulant EDTA, heparin nebo citronan) nebo séru, případně v likvoru. Plazma s heparinem dává falešně pozitivní výsledky, proto se doporučuje použít spíše EDTA nebo citronan, které maskují vápenaté ionty.

C4 je relativně nestálý protein (zejména v přítomnosti Ca²⁺). Stabilita vzorku (plazma, sérum): 18 - 26 °C 1 – 2 dny, 2 - 8 °C 2 – 7 dnů, -20 °C 12 týdnů. Pro delší skladování se doporučuje -70 °C. Nicméně se také uvádí, že maximální čas od získání do zpracování vzorku je 1 den při doporučené teplotě 4°C. V průběhu skladování dochází v séru k pomalé defragmentaci C4 proteinů na C4 komponenty (fragmentace je inhibována EDTA). Tyto fragmenty stále obsahují reaktivní epitopy, které mohou způsobit zvýšení signálu pro intaktní protein. Krevní elementy je nutné oddělit do 1 h po odběru. Opakované zamrazení vzorku se nedoporučuje.

Stanovení ruší chylozita a stáří séra (dochází ke zvyšování hladiny C4). V těhotenství jsou výsledky vyšší, naopak v době 6 měsíců po porodu nižší.

Poznámky k analytické metodě

Stanovení C4 se provádí imunonefelometricky (preciznost v sérii CV 1,1 – 4,0 %; vychýlení ‑11,1 %), imunoturbidimetricky (vychýlení +1,2 až +7,9 %; celková reprodukovatelnost CV 1,4 – 4,2 %; výtěžnost 90 – 110 %; efekt nadbytku antigenu se neprojevuje do koncentrace C4 komplementu 5 g/l) , elektroimunodifuzí nebo radiální imunodifuzí (reprodukovatelnost mezi sériemi 6,8 – 8,8 %). Při imunonefelometrii a imunoturbidimetrii se při skladování séra projeví falešná pozitivita a zvýšení závisí od použité protilátky.

Komerčně dostupná je kompetitivní ELISA (POD marker) na mikrotitračních destičkách (opakovatelnost CV 4,9 %; reprodukovatelnost mezi sériemi 8,3 %; výtěžnost 87 – 120 %). Lze použít také imunofluorescence s FITC jako markerem (opakovatelnost CV 7,4 %; reprodukovatelnost mezi sériemi 9,7 %).

Je také popsána western blot analýza.

Při elektroforéze migruje v oblasti β1 (ovšem na intenzitu této zóny nemá téměř vliv).

Referenční metoda neexistuje, certifikovaný referenční materiál: CRM 470 (IRMM Geel, Belgie) je pro složku C4c komplementu.

HPLC nebo dokonce LC/MS slouží jen pro vědecké studie vyžadující podrobnosti o jednotlivých složkách C3 komplementu.

Toleranční limit EHK: 28 %.

Interference

Výsledky stanovení C4 snižují: chlorpromazin, rtg kontrastní látky aj.

Výsledky stanovení C4 zvyšují: Waldenströmova makroglobulinémie.

Další informace

Principy analytických postupů

Postupy pro hodnocení aktivit enzymů

Postupy pro hodnocení koncentrací proteinů

Petr Štern, 2010-03-08