Stanovení cyklosporinu
Synonyma
cyklosporin A, ciclosporin;
Sandimmune, Neoral, Gengraf, Consupren;
CSA, CYPA, CyA
Mezinárodní zkratka neexistuje, ale běžně se používají: CSA (Google 337 000), CYPA (Google 156 000), CyA (Google 60 600)
Preanalytická fáze
Odběr 12 – 18 h po orálním podání, 12 h po intravenózním
podání nebo bezprostředně před další dávkou.
V ČR doporučeno stanovení v plné, nesrážlivé krvi
(antikoagulans EDTA). Nemrazit, neměřit v krevním séru. V literatuře
uvedeno také stanovení v plazmě (antikoagulans EDTA) nebo séru.
Stabilita vzorku (sérum, plazma) 20 – 25 °C: 13 dní, 4 – 8
°C: 7 dní, vzorek nemrazit!
Poznámky k analytické
metodě
Prvním komerčně dostupným postupem byla RIA
metoda v kompetitivním uspořádání (vychýlení 23 – 40 %). Monoklonální
protilátka byla značena buď 3H (při absorpci na aktivní uhlí je
velká variabilita výsledků) nebo 125I (křížová reaktivita
s některými metabolity).
Nyní se používá enzymová imunoanalýza EMIT
s glukóza-6-fosfátdehydrogenázou jako markerem (vychýlení +3 až +9 %,
výtěžnost 100 – 115 %, reprodukovatelnost v sérii 4,1 – 8,1 %, mezi sériemi 4,9
– 10,9 %) a fluorescenční homogenní polarizační technika FPIA, kdy je
protilátka značená fluoresceinem (vychýlení 12 – 31 %, reprodukovatelnost v sérii
6,1 – 7,0 %, mezi sériemi 4,4 – 4,6 %). Mezi doporučeními
z konference v Lake Louise v roce 1995 byla uvedena kritéria,
které musí splňovat metoda, aby mohla být použita pro TDM u pacientů léčených
cyklosporinem. Pro reprodukovatelnost: < 10 % při koncentraci 50 mg/l a
< 5 % při koncentraci 300 mg/l. Obecně mohou být výsledky imunochemickými
metodami ve srovnání s HPLC vyšší (např. FPIA o 20 – 174 %) vlivem
křížových reakcí metabolitů cyklosporinu. Imunochemické postupy jsou
nejběžnější.
Rovněž je používáno stanovení reverzní HPLC
(extrakce do éteru) s fotometrickou detekcí při 210 – 214 nm nebo
hmotnostním detektorem. Jako vnitřní standard se používá cyklosporin D, mobilní
fází je buď voda-metanol nebo metanol-acetonitril. Použití plastových zkumavek vede
ke vzniku falešných píků vedle cyklosporinů A i D. Mez stanovitelnosti pro
imunometody i HPLC je 25 µg/l.
Interference
Výsledky stanovení cyklosporinu snižuje: fenobarbital,
fenytoin, karbamazepin, kyselina valproová, pšeničný škrob (prášek
v rukavicích), rifampin, sulfadimidin (i.v.) trimethoprim (i.v.) aj.
Výsledky stanovení cyklosporinu zvyšují: androgeny, dilthiazem, erytromycin, etanol, flukonazol, grepový džus, itrakonazol, ketokonazol, nikardipin, verapamil, vorikonazol aj.
Další informace
Postupy pro hodnocení aktivit enzymů
Postupy pro hodnocení koncentrací proteinů
Petr Štern, 2010-03-08