Stanovení solubilního
transferinového receptoru
Synonyma
STFR, sTfR, soluble transferrin receptor, rozpustný transferinový receptor, cirkulující transferinový receptor, sérový
transferinový receptor
Oficiální zkratka neexistuje
Preanalytická fáze
Stanovení se provádí v séru nebo plazmě
(antikoagulans heparinát sodný nebo lithný, EDTA nebo citronan).
Stabilita: 20 – 25 °C 30 min – 2 dny, 4
– 8 °C 7 dní, -20° C 3 – 12 měsíců, pokud jsou zamrazeny do 24 h po odběru, při
-70 °C ještě déle.
Stanovení ruší ikterus, hemolýza a lipémie.
Poznámky k analytické metodě
Z imunochemických metod se nejvíce používá nefelometrie nebo
turbidimetrie, případně ELISA.
Turbidimetricky se sledují při 660 nm
agregáty, které vznikají při imunoreakci latexových částic, potažených
protilátkou vůči rozpustnému lidskému transferinovému receptoru s analytem
ze vzorku. Turbidance je přímo úměrná koncentraci analytu ve vzorku. Linearita 0,29 – 38 mg/l. Efekt nadbytku
antigenu se neprojevuje do 190 mg/l. Reprodukovatelnost v sérii má CV 1,02
– 3,62 %. Interference revmatoidního faktoru 810 kU/l < 10 %, kyseliny
askorbové 30 mg/l < 5 %.
Při nefelometrii se sledují při 840 nm agregáty, které vznikají
při imunoreakci latexových částic, potažených protilátkou vůči rozpustnému
lidskému transferinovému receptoru s analytem ze vzorku. Vzniklé agregáty
odrážejí světlo a intenzita odraženého světla je přímo úměrná koncentraci
analytu ve vzorku. Délka analýzy je 6 min.
Rozsah měření 0,17 – 4,15 mg/l. Reprodukovatelnost v sérii byla 2,63 –
3,66 %. Efekt nadbytku antigenu se neprojevuje do 36,28 mg/l. Výtěžnost metody
je 94,7 – 106,7 %.
ELISA v mikrotitračních
destičkách v sendvičovém uspořádání. V prvním kroku se váže
stanovovaný transferinový receptor na myší monoklonální protilátku zakotvenou
v jamkách. Po vypláchnutí se přidá druhá myší monoklonální protilátka
značená peroxidázou. Po opětném vypláchnutí pak substrát. Reakce se zastaví
okyselením 1 M kyselinou chlorovodíkovou a barevná reakce se detekuje
bichromaticky (450 vs. 540 nebo 570 nm). Mez detekce 0,095 mg/l. Rozsah
kalibrace 0 – 15,2 mg/l. Reprodukovatelnost CV v sérii 4,3 – 6,2 %, mezi
sériemi 5,4 – 6,4 %; výtěžnost: sérum 95 – 100 %, EDTA plazma 97 – 112 %,
heparinová plazma 101 – 112 %, citrátová plazma 105 – 121 %.
DELFIA technologie začíná vazbou
STFR na monoklonální kotvící protilátku, která je zachycena na jamku mikrotitrační
destičky streptavidin-biotinovým můstkem. Pak se naváže detekční protilátka,
která je konjugována s fluoreskujícím chelátem europia. Všechny reagenční
složky jsou v jamkách vysušeny a ochranná vrstva zabraňuje protilátkám
v nespecifické vazbě na pevnou fázi. Jsou-li jamky chráněny před vlhkostí,
zachovají si aktivitu > 90 % 5 měsíců za laboratorní teploty a 12 měsíců při
4 °C. Metoda je plně automatizovaná.
Detekční limit (3 SD) je 0,3 µg/l a metoda je lineární do 1 mg/l. Při
50-násobném ředení je rozsah metody 0,015 – 50 mg/l. Mez stanovitelnosti (CV
≤ 15 %) je 0,05 mg/l. Efekt nadbytku
antigenu nebyl pozorován do 150 mg/l STFR. Reprodukovatelnost
v sérii má CV 2,6 – 4,6 %, mezi sériemi 5,3 – 8,1 %. Výtěžnost byla 103 %
při použití přídavku do celé krve a 99 % při navážce do plazmy.
Mezinárodní referenční materiál nebyl v roce
2010 k dispozici.
Interference
Výsledky stanovení rozpustného transferinového
receptoru snižují: hemoglobin (1 g/l -9 %),
aj.
Výsledky
stanovení rozpustného transferinového receptoru zvyšují: bilirubin
(nekonjugovaný 1026 µmol/l +3 %, konjugovaný 1026 µmol/l +8%), aj.
Další informace
Petr Štern, 2011-01-03