Stanovení retinol
vázajícího proteinu (RBP)
Synonyma
RBP, retinol binding protein, protein vázající retinol
Preanalytická fáze
Stanovení se provádí v séru nebo plazmě
(antikoagulans heparinát lithný nebo sodný nebo EDTA). Maximální
čas od získání do zpracování vzorku jsou 2 h při laboratorní teplotě. Stabilita: 4 – 8 °C 7 dní, -20° C 3
měsíce, opakované zamrazení se nedoporučuje.
Stanovení ruší lipémie, vzorky nutno centrifugovat 10 min při 15000 g. Stanovení lze provádět také v moči
(ELISA).
Intraindividuální variace je 3,2 %,
interindividuální 11,4 %.
Poznámky k
analytické metodě
Z imunochemických metod se nejvíce používá nefelometrie nebo
turbidimetrie.
Před turbidimetrickou detekcí se provádí ve fosfátovém pufru
v přítomnosti polydokanolu (substituovaný oligoetanol) precipitace
polyklonální králičí protilátkou vůči RBP. Intenzita zákalu
odpovídá koncentraci RBP ve vzorku. Detekční limit metody je 1,3 mg/l, měřící
rozsah 10 – 130 mg/l, po ředění do 208 mg/l; celková reprodukovatelnost má CV
1,5 – 4,0 %. Efekt nadbytku antigenu se do 553 mg/l neprojevuje.
Při nefelometrii 840 nm lze stanovit koncentrace v rozsahu 12
– 175 mg/l s opakovatelností CV 2,0 – 3,4 %, reprodukovatelnost mezi
sériemi je 2,5 – 4,3 %. Výtěžnost je 98,9 – 101,2 %. Detekční limit při chybě
30 % je 12 mg/l.
Stanovení RBP lze provádět také sendvičovou heterogenní imunoanalýzou
soupravou ELISA v mikrotitračních destičkách. V prvním kroku
se váže stanovovaný RBP na polyklonální králičí protilátku zakotvenou
v jamkách. Po vypláchnutí se přidá druhá protilátka značená peroxidázou.
Po opětném vypláchnutí pak substrát (tetrametylbenzidin). Reakce se zastaví
okyselením (0,3 M kyselina sírová) a barevná reakce se detekuje bichromaticky
při 450 nm proti 620 nebo 690 nm. Stabilita výsledného zbarvení je 2 h.
Detekční limit metody je 0,9 µg/l. Reprodukovatelnost CV v sérii 5,0 %,
mezi sériemi 9,7 – 9,8 %.
Standardní referenční materiál nebyl v roce 2010 ještě
k dispozici.
Interference
Výsledky stanovení RPB snižují: alkoholismus,
bilirubin (1026 µmol/l -1 %), citronan, deficit zinku, hemoglobin (10 g/l -4
%), malnutrice, ztráta hmotnosti, aj.
Výsledky
stanovení RBP zvyšují: diurnální variace, kortikoidy, těhotenství, toluen (při
stanovení v moči), aj.
Další informace
Petr Štern, 2011-01-04