Stanovení
propoxyfenu
Synonyma
Dextropropoxyphene, D-Propoxyphene, Propoxyphene HCl
(1S,2R)-1-benzyl-3-(dimethylamino)-2-methyl-1-fenylpropyl
propionát
Algafan, Antalvic, Capadex, Darvocet, Darvocet-N, Darvon, Darvon-N, Deprancol, Depromic, Dexofen, Dextropropoxyphene-M,
Dextroproxifeno, Di-Antalvic, Di-Gesic, Dolene, Dolocap, Doloxen, Doloxene,
E-Lor, Erantin, Femadol, Genagesic, Harmar, Kesso-Gesic, Lentogesic, Novrad,
Paradex, Propacet, Prophene 65, Propoxychel,; Propoxyphene HCl 65, Proxagesic,
Wygesic
Preanalytická fáze
Průkaz nebo stanovení
v moči, méně často stanovení v séru. Vzorek moče lze skladovat
nechlazený 7 dní. Při delším skladování je třeba vzorek zamrazit. pH moče se může pohybovat v rozmezí 3 – 11. Nedoporučuje se
stabilizovat moč kyselinou boritou. Biologický poločas 8 – 24 h.
Je vhodné sledovat potenciální pokusy o ovlivnění výsledku (naředění
moče, přídavek oxidujících, redukujících a bělicích látek, či výraznou úpravu
pH moče).
Imunochemické postupy jsou nejběžnější. Problémem je křížová reaktivita
norpropoxyfenu.
Při homogenní metodě KIMS (kinetická interakce mikročástic
v roztoku) je propoxyfen vázán přes spojovací bílkovinu na karboxylované
polystyrénové částice a polyklonální kozí protilátka je volně v roztoku. Po
kompetitivní imunoreakci mezi propoxyfenem ze vzorku a konjugátem propoxyfenu
se sleduje zákal imunokomplexu změnou intenzity procházejícího světla. V případě
absence drogy ve vzorku se volné polyklonální kozí protilátky váží na drogu,
vázanou na mikročástici, a vytváří agregáty. Jak probíhá agregace ve vzorku,
který neobsahuje drogu, absorbance roste. Jestliže vzorek moči obsahuje drogu,
probíhá kompetice s částicemi s navázaným derivátem drogy o volné
protilátky. Protilátky vázané na drogu vzorku se již nemohou účastnit agregace
částic a následný vznik struktury částic je inhibován. Přítomnost drogy ve
vzorku snižuje nárůst absorbance a toto snížení je úměrné koncentraci drogy ve
vzorku. Obsah drogy ve vzorku je určen poměrem ke známé hodnotě cut-off
koncentrace drogy. Detekční limit je 10 µg/l. Reprodukovatelnost
v sérii má CV 3,6 – 6,9 %, mezi sériemi 4,5 – 8,4 %. Křížová reaktivita je pro norpropoxyfen 69 % a p‑hydroxypropoxyfen
36 %. Metoda je použitelná také jako kvalitativní test.
Homogenní
imunoanalýza EMIT používá jako značku bakteriální glukóza-6-fosfát
dehydrogenázu, která pokud není v imunokomplexu oxiduje glukóza-6-fosfát
na glukonolakton-6-fosfát a současně redukuje NAD+ na NADH, což se
sleduje při 340 nm. Používá se ovčí polyklonální protilátka vůči propoxyfenu.
Citlivost analýzy je 75 µg/l. Metoda má reprodukovatelnost v sérii CV 2,0
– 7,3 %, mezi laboratořemi 2,1 – 7,9 %; výtěžnost 89 – 115 %. Celková nejistota
metody je 30 µg/l. Falešnou pozitivitu může způsobit difenhydramin.
K dispozici jsou také analytické filmy pro kvalitativní test.
CEDIA je homogenní
analýza, která využívá kompetice konjugátu propoxyfenu s malým štěpem
β-galaktozidázy a propoxyfenu ze vzorku o volná místa protilátky.
Nespotřebovaný konjugát se opět spojí s komplementárním velkým štěpem
β-galaktozidázy na aktivní enzym, který štěpí o-nitrofenyl-β-galaktopyranosid
a hydrolýza se sleduje při 400 – 420 nm.
ELISA je založena na
kompetitivní reakci mezi propoxyfenem ze vzorku a propoxyfenem značeným
křenovou peroxidázou o vazebná místa protilátky, kterou jsou potaženy jamky
mikrotitračních destiček. Po promytí se přidá tetrametylbenzidin a výsledné
zbarvení se po zastavení reakce sleduje při 450 nm vertikální fotometrií.
Homogenní fluorescenční FPIA stanovení lze provádět
s reprodukovatelností v sérii CV 1,4 – 2,5 %, mezi sériemi 2,5 – 4,0
%. Křížová reaktivita na hlavní metabolit norpopoxyfen je značná: 29,3 – 92,6
%.
Propoxyfen
je součásti řady kvalitativních panelových testů na drogy
v moči a je možné prokázat koncentrace > 300 µg/l. K dispozici je
také kvalitativní test výhradně na propoxyfen. Převážně se využívá
imunochromatografie a markerem je obvykle koloidní zlato.
GC-MS postup vyžaduje zahuštění vzorku a jeho derivatizaci. Umožňuje stanovení
v rozsahu 100 – 2000 µg/l. Reprodukovatelnost metody dosahuje CV 4 – 7 %.
LC/MS/MS analyzuje vzorek
spolu s deuterovaným vnitřním standardem a pufrem pomocí iontového
elektrospreje. Propoxyfen se eluuje v izokratickém režimu acetonitrilem.
Metoda je použitelná v rozsahu 5 – 4500 µg/l, s detekčním limitem 2,9
µg/l a funkční citlivostí 4,9 µg/l. Reprodukovatelnost
má CV v sérii 1,12 – 3,85 %, mezi dny 3,8 – 8,28 %.
Interference
Výsledky stanovení propoxyfenu v séru snižuje: kouření.
Výsledky stanovení propoxyfenu v séru zvyšuje: difenhydramin.
Další informace
Petr Štern, 2011-01-04