Stanovení
primidonu
Synonyma
Apo-Primidone, Desoxyphenobarbital, Hexamidinum, Liskantin, Majsolin, Misodine, Mizodin, Mylepsinum, Mysoline, Primaclone, Primidone, Prysoline, Resimatil, Sertan
5-ethyl-5-fenyl-hexahydropyrimidin-4,6-dion
Preanalytická fáze
Stanovení se provádí v séru, případně v
plazmě (koagulant EDTA, heparin).
Stabilita
vzorku: 2 – 8 °C: plazma, sérum 7 dnů; -20 °C: plazma, sérum 5 měsíců.
Doporučený odběr
je před další dávkou. Transportovat v chladu. Možné ztráty vazbou na
separační gely. Biologický poločas 3 – 20 h.
Poznámky k analytické metodě
Ke stanovení primidonu se používá především kompetitivních
imunoanalytických metod, dále TLC, GC a HPLC.
Heterogenní
enzymová imunoanalýza využívá reakce peroxidázového markeru (po
kompetitivní reakci léku a léku konjugovaného s peroxidázou o vazebná místa na protilátce a vypláchnutí nevázané
frakce) s leukobarvivem a peroxidem vodíku, což se sleduje reflexní
fotometrii při 540 nm.
Kompetitivní EMIT využívá soutěže primidonu ze vzorku a konjugátu
primidonu s glukóza-6-fosfátdehydrogenázou a vazebná místa na protilátce.
Enzymová značka je v imunokomplexu inhibována. Čím více léčiva je ve
vzorku, tím méně konjugátu se naváže a měřená aktivita enzymu bude vyšší. Enzym
se získává z bakterií Leuconostoc
mesenteroides a proto endogenní enzym při reakci neinterferuje. Reakce se
sleduje v intervalu 11 – 92 µmol/l. Reprodukovatelnost
v sérii CV 2,8 – 2,9 %, celková 4,2 – 6,2 %.
FPIA využívá kompetice
mezi léčivem ze vzorku a léčivem označeným derivátem fluoresceinu o vazebná
místa na protilátce. V imunokomplexu má fluorescein omezenou pohyblivost a
vyšší emisi polarizovaného světla. Množství konjugátu v imunokomplexu je
tím nižší, čím je více léčiva ve vzorku, tedy měřený signál je nepřímo úměrný
koncentraci primidonu ve vzorku. Reakční čas je 10 min. Reprodukovatelnost v sérii je 7,8 % a mezi sériemi 3,0 %.
TLC je možné použít
jako kvantitativní metodu. Po extrakci do chloroformu se odparek rozpustí ve směsi chloroform-kyselina octová 9:1. Po
rozdělení na silikagelu se provede denzitometrické vyhodnocení. Reprodukovatelnost
detekční limit je 4,85 µmol/l; výtěžnost byla 93,6 %.
Plynová chromatografie použila jako vnitřní
standard 5-metyl-5-fenylhydantoin a extrakce se prováděla do metylenchloridu.
Reprodukovatelnost mezi dny byla CV 7,6 % na hladině 92 µmol/l.
HPLC na reverzní fázi dosahuje reprodukovatelnost
v sérii CV 5,06 – 9,75 %, mezi sériemi 4 %; výtěžnost 99,5 – 102,6 %.
Detekce se provádí při 210 nm.
Mezinárodní standard pro primidon nese označení NIST SRM
900 (rok 1981).
Toleranční limit EHK: 24 %.
Výsledky stanovení
primidonu snižují: acetazolamid, fenytoin, hemoglobin 10 g/l, karbamazepin, lipémie (intralipid 5
g/l), aj.
Výsledky
stanovení primidonu v séru zvyšují: bilirubin 260 µmol/l, kyselina
valproová, poškození ledvin, aj.
Další informace
Petr Štern, 2011-01-04