Stanovení krve ve
stolici (okultní krvácení)
Synonyma
Fecal occult blood test, FOBT, stool occult blood; guaiac smear test, fecal
immunochemical test, FIT
Preanalytická fáze
Stanovení se provádí ve stolici. Zvláštní
příprava pacienta není nutná, ale doporučuje se 3 dny před odběrem vysadit
červené maso a vitamin C a 7 dní před odběrem acylpyrin a ibuprofen. Ke stolici
se obvykle přidává roztok kyseliny citrónové a dextrózy.
Stabilita: 2 – 8 °C 5 dní, vzorek lze
skladovat i na suchém ledu.
Poznámky k analytické
metodě
Prakticky všechny testy na
okultní krvácení prováděné v ČR jsou kvalitativní.
Pro screeningový postup je doporučeným testem chemický
test, založený na
pseudoperoxidázové reakci hemoglobinu s guajakovou pryskyřicí. Substrátem byl původně kancerogenní benzidin, později
o-tolidin nebo tetrametylbenzidin. Guajaková pryskyřice obsahuje guajakol
(o-metoxyfenol), který je v redukované bezbarvý a po oxidaci se zbarvuje
do modrozelena. Oxidace probíhá peroxidem vodíku, katalyzátorem je hemoglobin s
pseudoperoxidázovou aktivitou. Souprava, která obsahuje 3 testy se dvěma
okénky. Pacient odebere vždy dva různé vzorky ze tří po sobě následujících
stolicí, které rozetře na označená místa testu, testovací okénka uzavře a testy
odešle do laboratoře. Činidlo se aplikuje na opačnou stranu okének. Hodnocení
je pozitivní nebo negativní. Citlivost testu je přibližně 5 mg hemoglobinu/g
stolice. Falešná pozitivita při srovnání s imunochemickými testy je nulová.
Pokud se test nezpracuje brzy, může dojít na políčku k vyschnutí. Při
rehydrataci falešná pozitivita stoupne ze 2 – 3 % na 8 – 16 %.
Chemický test pro domácí použití
používá jako substrát tetrametylbenzidin a provedení trvá 2 minuty. V případě
pozitivity vzniká modrozelené zbarvení. Citlivost 2 mg hemoglobinu na 100 ml
vody.
Imunochemické testy
mají ovlivněnou svou senzitivitu (pozitivní průkaz) rozdílnou degradací obou
složek hemoglobinu. Globin je degradován rychleji, degradace hemu je pomalejší.
Využívají se čtyři principy: reverzní pasivní
hemaglutinace, latexové imunoprecipitace, radiální imunodifúze a imunoafinitní
chromatografie. Citlivost imunochemických testů je výrazně vyšší než u
chemických testů. Mez detekce je < 0,1 mg hemoglobinu/g stolice.
Falešná pozitivita imunochemických testů je 4 – 7 %. Imunochemické testy
nereagují s léky, červeným masem a deriváty hemu.
V
poslední době je nejrozšířenější imunoafinitní chromatografie.
Laboratorní zpracování vzorku spočívá v extrakci a aplikaci kapky extraktu
na testované políčko. Výsledek je 1 nebo 2 barevné proužky, které detekují
přítomnost pouze protilátky s barevným markerem (negativní test, 1 barevný
proužek) nebo vznik komplexu antigenu s protilátkou (pozitivní test, 2 barevné
proužky).
Další postup je dražší a sleduje fluorescenci porfyrinových
derivátů hemu. Zatímco porfyriny nereagují s peroxidázou, hemoglobin a
volný hem s ní reaguje.
Byla
také použita automatizovaná metoda hmotnostní spektrometrie, kdy je
desorpce a ionizace matrice pomocí laseru s následným sledováním v analyzátoru
doby letu (MALDI-TOF MS). Pro MS jsou zpracovány α-
a β-řetězce hemoglobinů rozpustných ve vodě po reakci s nasyceným
roztokem 4-hydroxy-α-kyanoskořicové kyseliny.
Citlivost je 10 – 100-krát vyšší než u chemického guajakového testu.
Studie v posledních letech testují několik imunochemických
analyzátorů pro kvantitativní stanovení krve ve stolici, většina je
japonské výroby. Analyzátory
stanovují hemoglobin imunochemicky. Používá se metoda nepřímé aglutinace.
Magnetické částice želatiny jsou potažené králičí protilátkou vůči lidskému
hemoglobinu. Aglutinace je urychlována magnetickým polem směrem ke dnu kónické
jamky. Destička se pak vychýlí o 60° z horizontální polohy, aby se
uvolnily volné magnetické částice. V přítomnosti hemoglobinu zůstávají částice
ve špičce jamky a řada volných magnetických částic je kratší. Délka této řady
se měří reflexní fotometrii při 690 nm. Citlivost systému je 0,1 – 0,2 mg
hemoglobinu / g stolice, tj. 20 mg Hb/l.
Interference
Falešnou negativitu způsobují: askorutin, vitamin
C, aj.
Falešnou
pozitivitu způsobují: acylpyrin, anopyrin, antacida, fluoridy,
dusitany,hemoglobin (maso, krev), histamin, ibuprofen, intenzivní cvičení,
kolchicin, nesteroidní antiflogistika, olovo, peroxidázy (kořenová zelenina),
ryby, steroidy, šťavelany, aj.
Další informace
Petr Štern, 2011-01-07