Stanovení nortriptylinu

Synonyma

Acetexa, Allergon, Altilev, Avantyl, Aventyl, Aventyl hydrochloride, Ateben, Demethylamitriptylene, Demethylamitriptyline, Desitriptilina, Desitriptyline, Desmethylamitriptylin, Lumbeck, Noramitriptyline, Norfenazin, Noritren, Nortrilen, Nortriptyline, Nortriptyline hydrochloride, Norzepine,Norval, Nu-Nortriptyline, Pamelor, Paxtibi, Psychostyl, Sensaval, Sensival Sesaval, Ventyl, Vividyl

3-(10,11-dihydro-5H-dibenzo[a,d]cyclohepten-5-yliden)-N-methyl-1-propanamin

Preanalytická fáze

Stanovení se provádí obvykle v séru, případně v moči.

Vzorky séra jsou stabilní při laboratorní teplotě 5 dní, vzorky lze skladovat v lednici při 2 – 8 °C po dobu 2 týdnů. Při zamrazení na -20 °C je stabilita 6 měsíců.

Poznámky k analytické metodě

Pro kvantitativní stanovení se používá enzymová imunoanalýza (EMIT) a fluorescenční homogenní polarizační technika FPIA. Obvyklé je kompetitivní uspořádání.

Homogenní imunoanalýza EMIT používá jako značku glukóza-6-fosfát dehydrogenázu, která pokud není v imunokomplexu oxiduje glukóza-6-fosfát na glukonolakton-6-fosfát a současně redukuje NAD⁺ na NADH, což se sleduje při 340 nm. Metoda má reprodukovatelnost mezi sériemi CV 1,4 – 1,9 %, výtěžnost 95 – 103 % v rozsahu 0 – 600 µg/l.

ELISA je založena na nekompetitivní reakci. Vzorek reaguje s monoklonální protilátkou a v druhém kroku se zbylá volná protilátka naváže na mikrotitrační destičku potaženou nortriptylenem s navázaným lysozymem. Vázaná frakce monoklonální protilátky se prokáže králičím myším antisérem s navázanou křenovou peroxidázou fotometricky při 410 nm. Při reakci ruší chlorpromazin a fenytoin. Reprodukovatelnost v sérii CV 10 % a mezi sériemi 13 %.

Homogenní fluorescenční FPIA stanovení lze provádět v koncentračním rozsahu 0 – 300 µg/l s reprodukovatelností v sérii CV 2,0 – 6,3 %, mezi sériemi 1,1 – 4,2 %; výtěžnost byla 89 – 95 %. Mez stanovitelnosti je < 30 µg/l.

TLC s radioaktivní detekcí vychází z extrakce nortriptylinu, následné acetylace radioaktivním acetanhydridem, oddělení acetylnortriptylinu TLC a změření jeho radioaktivity.

GLC postup začíná extrakcí do hexanu při pH 9. Vnitřní standard je extrahován spolu s léčivem. Pro zlepšení separace je nortriptylin acetylován. Detektor je selektivní vůči organickým sloučeninám dusíku. Mez detekce je 10 – 15 µg/l. Reprodukovatelnost v sérii CV 7,6%.

HPLC stanovení začíná derivatizací 9H-fluoren-9-yl-metylchlormravenčanem a dělením na izokratické reverzní fázi (C₁₈) s fluorescenční detekcí. Deproteinace a derivatizace probíhá současně. Metoda je lineární v rozsahu 5 – 5000 µg/l. Dosažená reprodukovatelnost mezi dny byla CV < 8 %. Mez detekce byla 2 µg/l, mez stanovitelnosti 10 µg/l.

Mezinárodně uznávaný certifikovaný materiál není dosud k dispozici, ale těmto požadavkům se blíží nortriptylin.HCl od Sigma-Aldrich.

Interference

Výsledky stanovení nortriptylinu v séru zvyšují: alimenazin, cimetidin, cyklobenzaprin, difenhydramin, fluoxetin, chlorpromazin, karbamazepin, MAO, perfenazin, thioridazin, tricyklické antidepresanty, tyroidní hormony, aj.

Výsledky stanovení nortriptylinu v séru snižují: barbituráty, fenytoin, chloralhydrát, kouření, aj.

Další informace

Principy analytických postupů

Petr Štern, 2011-02-28