Stanovení metamfetaminu
Synonyma
Anadrex, deoxyefedrin,
desoxyefedrin, Desoxyn,
dextromethamfetamin, Madrine, metamfetamin hydrochlorid, Methampex, methamphetamine, Methedrine,
metylamfetamin, N-metylamfetamin,
Syndrox
N-methyl-1-fenylpropan-2-amin
applesauce, codswallop, crackpot, crank, crosspatch, crystal, doe,
drinking glass, ecstasy, field glass, folderol, frappe, frosting, fruitcake,
glass, glassful, grouch, grump, chalk, chicken feed, churl, ice, ice rink,
ice-skating rink, icing, internal-combustion engine, looking glass, meth, nut, nut case,
pervitin, rubbish, scrap, scratch, screwball, scum, shabu,
sparkler, speed, starter spyglass, trash, tripe, trumpery, water ice, wish-wash, zip
Preanalytická fáze
Stanovení se provádí obvykle v moči. Vzorky lze
skladovat v lednici při 2 – 8 °C po dobu 5 týdnů. Při zamrazení na -20 °C
je stabilita 1 měsíc, ale nedoporučuje se opakovaně vzorky zamrazovat. Biologický poločas je 10 – 30 h v závislosti na pH moče (alkalizace
jej prodlužuje, okyselení zkracuje).
Poznámky k
analytické metodě
Imunochemické postupy jsou nejběžnější. Zejména
jednoduché kvalitativní testy s jednoúčelovými proužky nebo pro
multidrogový screening. Test prokazuje přítomnost drogy, tj. metadonu v moči.
Konjugát (metamfetamin-protein) imobilizovaný v membráně testovací
destičky soutěží kompetitivně s metamfetaminem přítomným v testované
moči o možnost navázaní se na omezené množství koloidním zlatem značených protilátek
nanesených na začátek testovací membrány. Barevné monoklonální protilátky proti
metamfetaminu jsou spolu s močí posunovány po membráně. Pokud
v moči metamfetamin není, dostanou se nenavázané protilátky až k pásu konjugátů
v oblasti označené písmenem T (Test
region) a vytvoří zde barevný pruh, což znamená negativní výsledek testu.
Pokud je v moči metamfetamin přítomný, navážou se na ně protilátky hned na
počátku membrány a k pásu konjugátů se již jako volné nedostanou.
V oblasti označené písmenem T proto žádný barevný pás nevznikne, což
znamená pozitivní výsledek testu. Podmínkou vydání kvalitativního výsledku
testu (pozitivní nebo negativní) je přítomnost barevného kontrolního pruhu
v oblasti membrány označené písmenem C (Control region). Ten vytvoří reakce jiného systému
antigen/protilátka přidávaného výrobcem do setu. Kontrolní barevný pruh
potvrzuje, že test byl proveden správně a že je funkční, tj. že bylo na
testovací destičku naneseno dostatečné množství moče a že se moč dobře nasákla
do celé plochy testovací membrány. Výhodná je také možnost poskytovaná
některými výrobci a to skenování exponované destičky a uložení vytvořeného
obrázku v elektronické formě, což umožňuje eventuální pozdější dokladování
či jiné využití.
Pro kvantitativní stanovení se používá enzymová imunoanalýza (CEDIA cloned enzyme donor immunoassay, ELISA i EMIT) a fluorescenční homogenní polarizační technika FPIA,
případně bioluminiscence. Obvyklé je kompetitivní uspořádání.
Homogenní
imunoanalýza EMIT používá jako značku glukóza-6-fosfát dehydrogenázu,
která pokud není v imunokomplexu oxiduje glukóza-6-fosfát na
glukonolakton-6-fosfát a současně redukuje NAD+ na NADH, což se
sleduje při 340 nm. Metoda má reprodukovatelnost v sérii CV 0,47 – 0,53 %, mezi
sériemi 1,48 – 1,60 %.
CEDIA je homogenní
analýza, která využívá kompetice konjugátu metamfetaminu s malým štěpem
β-galaktozidázy a metamfetaminu ze vzorku o volná místa protilátky.
Nespotřebovaný konjugát se opět spojí s komplementárním velkým štěpem
β-galaktozidázy na aktivní enzym, který štěpí
o-nitrofenyl-β-galaktopyranosid a hydrolýza se sleduje při 400 – 420 nm.
ELISA je založena na
kompetitivní reakci mezi metamfetaminem ze vzorku a metamfetaminem značeným
křenovou peroxidázou o vazebná místa protilátky, kterou jsou potaženy jamky
mikrotitračních destiček. Po promytí se přidá tetrametylbenzidin a výsledné
zbarvení se po zastavení reakce sleduje při 450 nm vertikální fotometrií. Mez
detekce je 1 µg/l. Senzitivita je 97 %, specifita 100 %. Reprodukovatelnost
v sérii CV 2,5 % a mezi sériemi 3,7 %.
Homogenní fluorescenční FPIA stanovení lze
provádět v koncentračním rozsahu 300 – 2000 µg/l
s reprodukovatelností v sérii CV 1,7 – 5,2 %, mezi dny 4,9 – 7,4 %.
Mez stanovitelnosti je 300 µg/l.
Využívá se také řada chromatografických technik (GC, HPLC, TLC).
Referenční metodou je GC/MS s D5-metamfetaminem
jako vnitřním standardem. Vzorky jsou oxidovány jodistanem a extrahovány do
1-chlorbutanu. Před nástřikem se provede extrakce do 4-karbetoxyhexafluorbutyrylchloridu. Rozsah měření 25 µg/l – 25 mg/l.
Reprodukovatelnost v sérii CV < 2 %, mezi dny < 10 %.
HPLC se provádí na reverzní fázi
kyselina fosforečná (pH 2,1) – acetonitril 9:1 při 40 °C. Dosažená
reprodukovatelnost v sérii byla CV 0,84 – 2,63 %, mezi dny 1,92 – 5,11 %;
vychýlení -0,72 % až +2,04 %. Linearita metody je v rozsahu 5 – 333 mg/l.
Současně lze stanovit amfetamin a kofein. Mez detekce byla 0,5 mg/l, mez
stanovitelnosti 1,5 mg/l.
Interference
Výsledky stanovení
metamfetaminu v moči zvyšují: alkalické pH, antialergika, benzfetamin,
efedrin, fenetylamin, fenfluramin,
fenmetrazin, fentermin, fenylpropanolamin, chlorpromazin, chlorochin, chinakrin,
mefentermin, N-acetylprokainamid, pseudoefedrin, ranitidin, tyramin, aj.
Další informace
Petr Štern, 2011-02-28