Stanovení metakvalonu
Synonyma
Aqual, Cateudyl, Citexal, Dormigoa, Dormogen, Dormutil, Dorsedin, Fadormir,
Holodorm, Hyminal, Hyminal monohydrochloride, Hypcol, Hypocol, Hyptor, Hyptor base, Ipnofil, Melsed, Melsed HCL, Melsedin, Melsomin, Mequal, Mequin, Metachalon, Metaqualon, Methachalonum, Methaqualon, Methaqualoneinone, Methased, Metolquizolone, Mollinox, Motolon,
Mozambin, Nethaqualone, Nobedorm, Noctilene, Normi-nox,
Omnyl, Optimil, Optinoxan, Orthonal, Ortonal, Parest, Parminal, Pro-dorm, QZ 2
hydrochloride, Quaalude, Quaalude hydrochloride, Revonal, Rorer 148, Rorer 714,
Roulone, Rouqualone, Sindesvel, Somberol, Somnafac, Somnofac, Somnomed, Sonal,
Sopor, Sopor hydrochloride, Soverin, TR 495 monohydrochloride, Torinal, Tuazol,
Tuazole, Tuazolone
2-methyl-3-(2-methylfenyl)chinazolin-4-on
Preanalytická fáze
Stanovení v moči. Vzorky je
třeba skladovat v lednici při 2 – 8 °C po dobu 5 – 7 dní; delší skladování
vyžaduje -20 °C. Opakované zamrazování vzorků se nedoporučuje. Analýza se
provádí 4 – 6 h po aplikaci.
Je vhodné sledovat potenciální pokusy o ovlivnění výsledku (naředění
moče, přídavek oxidujících, redukujících a bělicích látek, či výraznou úpravu
pH moče).
Původní klasické testy stanovovaly metakvalon po extrakci v UV
oblasti, kde má maxima 225, 265, 305 a 316 nm. Mez detekce byla 1 mg/l.
Jednoduchý kvalitativní
barevný test lze provést s 2,4,6-triaminopyrimidinem.
Imunochemické postupy jsou
nejběžnější. Zejména jednoduché kvalitativní testy s jednoúčelovými proužky
nebo pro multidrogový screening. Test prokazuje přítomnost drogy, tj. metadonu
v moči. Konjugát (metadon-protein) imobilizovaný v membráně testovací
destičky soutěží kompetitivně s metadonem přítomným v testované moči
o možnost navázaní se na omezené množství koloidním zlatem značených protilátek
nanesených na začátek testovací membrány. Barevné monoklonální protilátky proti
metadonu jsou spolu s močí posunovány po membráně. Pokud v moči
metadon není, dostanou se nenavázané protilátky až k pásu konjugátů v oblasti označené
písmenem T (Test region) a vytvoří
zde barevný pruh, což znamená negativní výsledek testu. Pokud je v moči
metadon přítomný, navážou se na ně protilátky hned na počátku membrány a
k pásu konjugátů se již jako volné nedostanou. V oblasti označené
písmenem T proto žádný barevný pás nevznikne, což znamená pozitivní výsledek
testu. Podmínkou vydání kvalitativního výsledku testu (pozitivní nebo
negativní) je přítomnost barevného kontrolního pruhu v oblasti membrány
označené písmenem C (Control region).
Ten vytvoří reakce jiného systému antigen/protilátka přidávaného výrobcem do
setu. Kontrolní barevný pruh potvrzuje, že test byl proveden správně a že je
funkční, tj. že bylo na testovací destičku naneseno dostatečné množství moče a
že se moč dobře nasákla do celé plochy testovací membrány. Výhodná je také
možnost poskytovaná některými výrobci a to skenování exponované destičky a
uložení vytvořeného obrázku v elektronické formě, což umožňuje eventuální
pozdější dokladování či jiné využití. Cut-off hodnota
proužků je 300 µg/l.
RIA analýza je už historický postup.
Homogenní
imunoanalýza EMIT používá jako značku glukóza-6-fosfát dehydrogenázu,
která pokud není v imunokomplexu s myší monoklonální protilátkou
oxiduje glukóza-6-fosfát na glukonolakton-6-fosfát a současně redukuje NAD+
na NADH, což se sleduje při 340 nm. Relativní specifita i senzitivita je 100 %.
Reprodukovatelnost měla CV 0,6 – 1,1 %.
ELISA je založena na
kompetitivní reakci mezi metakvalonem ze vzorku a metakvalonem značeným
křenovou peroxidázou o vazebná místa protilátky, kterou jsou potaženy jamky
mikrotitračních destiček. Po promytí se přidá tetrametylbenzidin a výsledné
zbarvení se po zastavení reakce sleduje při 450 nm vertikální fotometrií.
Při homogenní metodě KIMS
(kinetická interakce mikročástic v roztoku) je metadon vázán přes
spojovací bílkovinu na karboxylované polystyrénové částice a polyklonální kozí
protilátka volně v roztoku. Po kompetitivní imunoreakci mezi metadonem ze
vzorku a konjugátem metadonu se sleduje zákal imunokomplexu. Cut-off
semikvantitativního testu je 300 µg/l. Reprodukovatelnost pro cut-off
v sérii CV je 1,1 – 2,7 %, mezi dny 3,2 – 4,4 %. Kvantitativní test má
limit detekce 19 µg/l, reprodukovatelnost v sérii CV je 3,1 – 5,8 %, mezi
dny 4,2 – 7,2 %. Detekční limit metody je 38 µg/l.
Test není vhodný pro soudně lékařské a forenzní potřeby, pro které by
výsledek testu musel být potvrzen vhodnou kvantitativní a specifickou metodou
založenou například na principu GC/MS nebo HPLC.
Kvalitativní TLC se provádí po extrakci do éteru na silikagelu a
pod ultrafialovým světlem.
Plynová chromatografie začíná extrakcí
metakvalonu z alkalického prostředí do éteru a následnou detekcí
s metadon hydrochloridem jako vnitřním standardem pomocí
plameno-ionizačního detektoru. Mez detekce je 20 µg/l metakvalonu.
GC-MS postup po extrakci a
chromatografii ke kvantifikaci používá ion 250. Reprodukovatelnost v sérii
je CV 6,2 – 12,9 %, mezi dny 6,5 – 12,0 %.
Na HPLC
koloně je používán jako mobilní fáze acetonitril-voda 26:74 a metakvalon se
detekuje při 210 nm.
Interference
Výsledky stanovení
metakvalonu v moči zvyšují: 3´-hydroxymetakvalon, 4´-hydroxymetakvalon,
6-hydroxymetakvalon, 2-hydroxymetylmetakvalon, 2´-hydroxymetylmetakvalon,
mefenamová kyselina, meklokvalon, neopiátová analgetika, aj.
Další informace
Petr Štern, 2011-02-28