Stanovení cholesterolu LDL
Synonyma
LDLC, LDL-C, low-density lipoprotein
cholesterol, β-lipoproteiny
Preanalytická
fáze
Odběr nalačno, vhodná doba
lačnění je 12 – 14 hodin. Pokyny k preanalytické úpravě vzorku: urychleně
centrifugovat a separovat.
Sérum,
plazma (lze použít EDTA nebo heparin, ostatní protisrážlivá činidla mohou být
příčinou chyb) – stabilita vzorku: 20 – 25 °C: 12 h, 4 – 8
°C: 10 dní, -20 °C: 12 týdnů.
Stanovení ovlivňuje věk, dieta, pohlaví,
menstruační cykly a má významný intraindividuální rozptyl. Po akutním
onemocnění, po infarktu myokardu, po hospitalizaci je vhodné dodržet odstup až
3 měsíců. Fyziologicky se koncentrace cholesterolu zvyšují během gravidity.
Nízké koncentrace cholesterolu v séru (plazmě) mohou být důsledkem malnutrice,
malabsorpce, hypertyreózy.
Poznámky
k analytické metodě
Heterogenní metody založené na
srážení polyanionty (polyvinylsulfát, dextran sulfát) nejsou vždy dostatečně
specifické a robustní pro oddělení VLDL obsahujících Apo B od LDL, obsahujících
také apo B. Kromě toho tyto metody obvykle vycházejí ze stanovení VLDL + HDL po
precipitaci LDL, takže LDL se měří pouze nepřímo.
Hlavním problémem stanovení zůstává nestejnoměrná reakce činidel
s LDL, IDL, Lp(a) a Lp-X. Některé metody při stanovení široké frakce LDL
zahrnou až 20 % VLDL nebo naopak nezahrnou až 30 % IDL a až 50 % LDL.
Imunoseparační
metody izolují LDL od chylomikronů, VLDL a HDL pomocí filtračního systému
obsahujícího protilátky proti apolipoproteinům AI a E na latexových kuličkách.
Reprodukovatelnost v sérii CV 1,2 –3,8%, mezi sériemi 2,0 – 5,1 %,
výtěžnost 96,4 – 97,8 %.
Homogenní
analytické metody se separací pomocí detergentů dosahují CV 0,7 – 3,1 %, výtěžnost 87 –
105 % a vychýlení ‑0,8 až -11,2 %.
První postup k uvolnění cholesterolu
z lipoproteinů jiných než LDL použije polymerní detergent. Tento
cholesterol reaguje s cholesterolesterázou, cholesteroloxidázou,
peroxidázou a 4‑aminoantipyrinem na bezbarvý produkt. Dalším činidlem je
detergent uvolňující cholesterol z LDL. LDL-cholesterol reaguje se
složkami prvního činidla a navíc s dvojsodnou solí
N,N-bis(4-sulfobutyl)-m-toluidinu, která je obsažena v druhém činidle;
vzniká barevný produkt. Reprodukovatelnost v sérii CV 0,6 – 1,5 %, celkové
CV 0,8 – 1,7 %. Vychýlení -2,6 až 0 %. Celková chyba 3,8 %.
Druhý postup používá emulgátor, který
stabilizuje LDL molekuly, takže jejich cholesterol nereaguje. Ostatní
lipoproteiny reagují s cholesterolesterázou, cholesteroloxidázou,
katalázou a N-(2-hydroxy-3-sulfopropyl)-3,5-dimethoxyanilinem a poskytují
bezbarvé produkty. Druhé činidlo obsahuje detergent uvolňující cholesterol
z LDL a azid sodný k inhibici katalázy. LDL-cholesterol reaguje se
složkami prvního činidla a peroxidázou s 4-aminoantipyrinem z druhého
činidla za vzniku barevného produktu. Reprodukovatelnost v sérii CV 0,5 –
1,1 %, celkové CV 1,0 – 1,4 %. Vychýlení -5,0 až -2,1 %. Celková chyba 5,9 %.
Třetí postup stabilizuje VLDL a chylomikrony
cyklodextrin sulfátem, dextran sulfátem a hořečnatými komplexy. První činidlo
ještě obsahuje peroxidázu a sodnou sůl
N-(2-hydroxy-3-sulfopropyl)-3,5-dimethoxyanilinu. Druhé činidlo tvoří stabilní
micely s HDL a již dříve stabilizovanými VLDL a chilomikrony, takže je
inhibována jejich reakce s cholesterolesterázou a cholesteroloxidázou.
LDL-cholesterol reaguje se složkami prvního činidla a navíc s reagenciemi
v druhém činidle: cholesterolesterázou, cholesteroloxidázou a 4‑aminoantipyrinem,
takže vzniká barevný produkt. Reprodukovatelnost v sérii CV 0,5 – 1,5 %,
celkové CV 1,3 – 1,9 %. Vychýlení -3,4 až +8,9 %. Celková chyba 5,8 %.
Čtvrtý postup používá ke stabilizaci LDL
molekul enzymový komplex. Cholesterol s ostatních lipoproteinů reaguje
s cholesterolesterázou, cholesteroloxidázou, katalázou a
N-(2-hydroxy-3-sulfopropyl)-3,5-dimethoxyanilinem a poskytují bezbarvé
produkty. Druhé činidlo obsahuje detergent uvolňující cholesterol z LDL a
azid sodný k inhibici katalázy. LDL-cholesterol reaguje se složkami
prvního činidla a peroxidázou s 4-aminoantipyrinem z druhého činidla
za vzniku barevného produktu. Reprodukovatelnost v sérii CV 0,6 – 0,9 %,
celkové CV 0,6 – 1,0 %. Vychýlení +9,6
až +18,0 %. Celková chyba 15,5 %.
Referenční metoda oficiálně neexistuje i
když někdy bývá za ní považována centrifugace v analytické ultracentrifuze.
Toleranční limit EHK:
15 %.
Interference
Koncentraci LDL-cholesterolu snižují:
aferéza, bezlepková dieta, α-cyklodextrin, česnek, etanol, estradiol,
hemodialýza, heparin, hladovění, IGF-I, interleukin 3, růstový hormon, rybí
tuk, sacharidová dieta, separační gely, tučné jídlo, vlákniny, aj.
Koncentraci LDL-cholesterolu zvyšují:
Intralipid, kouření, menopauza, nasycené mastné kyseliny, obezita,
omega-3-mastné kyseliny, palmitová kyselina, stres, těhotenství (týden po
porodu), transplantace ledviny, triacylglyceroly, aj.
Další informace
Petr Štern, 2011-02-28