Stanovení kyseliny
valproové
Synonyma
Valproát
Byk, Convulex, Convulexette, Depacon, Depakene, Depakin, Depakote, Depakote XR, Depamide, Deparkine, dipropyloctová kyselina, Divalproex Sodium, Epilim, Epival, Ergenyl, Gerot, Leptilan, Leptilen, Logical, Mylproin, Orfilept, Orfiril, Promonta, 2-propylvalerová kyselina, Propymal, Valkote, Vistora 2-propylpentanová kyselina Preanalytická fáze
Stanovení se provádí v séru, případně
v plazmě (koagulant EDTA), moči nebo mateřském mléku.
Stabilita vzorku: 20 – 25 °C: 2 dny; 4 – 8 °C: 7 dnů; -20 °C: 12 týdnů.
Poznámky k
analytické metodě
Kompetitivní EMIT
využívá soutěže kyseliny valproové ze vzorku a konjugátu kyseliny valproové
s glukóza-6-fosfátdehydrogenázou a vazebná místa na protilátce. Enzymová
značka je v imunokomplexu inhibována. Čím více léčiva je ve vzorky, tím
méně konjugátu se naváže a měřená aktivita enzymu bude vyšší. Pracovní rozsah
metody je 10 – 150 mg/l. Reprodukovatelnost v sérii CV 5,9 – 10,8 %.
CEDIA používá jako
první činidlo monoklonální protilátku, glukóza-6-fosfát a NAD+ a
jako druhé činidlo konjugát kyseliny valproové
s glukóza-6-fosfátdehydrogenázou v TRIS pufru.
FPIA využívá kompetice mezi léčivem ze vzorku a léčivem označeným derivátem
fluoresceinu o vazebná místa na protilátce. V imunokomplexu má fluorescein
omezenou pohyblivost a vyšší emisi polarizovaného světla. Množství konjugátu
v imunokomplexu je tím nižší, čím je více léčiva ve vzorku, tedy měřený
signál je nepřímo úměrný koncentraci kyseliny valproové ve vzorku. Reprodukovatelnost v sérii CV < 2,6 %,
mezi sériemi < 5,2 %; výtěžnost > 97 %.
Latexová aglutinace s antigenem vázaným na latex a volnou
protilátkou. Imunokomplex se stanovuje turbidimetricky nebo nefelometricky. Reprodukovatelnost v sérii CV 0,97 – 4,32 %.
Plynová chromatografie v koncentračním rozsahu 2 – 180 mg/l měla reprodukovatelnost
v sérii CV 4,3 – 5,8 %.
HPLC začíná extrakcí do
dichlormetanu. Jako mobilní fáze se používá buď hexan-chloroform (94:6) nebo
acetonitril-metanol-fosfátový pufr (6:1:3) a vnitřní standard je buď kyselina
kapronová nebo kaprylová. Detekce se provádí při 254 nm. Při použití MS
detektoru s elektrosprejovou ionizací v intervalu 0,5 – 60 µg/l byl CV
< 10 % a výtěžnost 92,9 – 98,3 %.
Izotopová diluce s GC-MS je navržena jako referenční metoda. Jako vnitřní standard je použita 2-propyl[3,3,3-d3]
valerová[5,5,5-d3] kyselina. Měření se provádí elektronovou nebo
chemickou ionizací a monitorováním vybraného iontu ve fragmentometrickém módu.
Tímto způsobem lze dosáhnout detekční limit 10 µg/l a CV < 1,5 %.
Většina prací uvádí dobrou korelaci mezi EMIT,
FPIA, GLC a HPLC.
Standardní referenční materiál NIST pro kyselinu valproovou nese
označení: SRM 1599
Anticonvulsant Drug Level Assay Standard - Carbamazepine, valproic
acid. Je deklarován pro tři koncentrace stanovované plynovou nebo kapalinovou
chromatografií.
Toleranční limit EHK: 24 %.
Interference
Výsledky stanovení
kyseliny valproové snižuje extrémně vysoký bilirubin (> 1020 µmol/l).
Výsledky stanovení
kyseliny valproové zvyšují: cimetidin, dikumarol, fenylbutazon, 3-ketovalerová
kyselina, ranitidin, salicyláty, aj.
Další informace
Petr Štern, 2011-03-02