Stanovení kofeinu
Synonyma
1,3,7-trimethylxanthin, Coffee Break, Dexitac, Durvitan, Magnum, Max
Alert, Magnum, Mole, No-Doz, Pep Back, Percoffedrinol N, Percutafeine,
Pick-me-up, Pro-Plus, Stay Awake, Vivarin
3,7-dihydro-1,3,7-trimethyl-1H-purin-2,6-dion
Preanalytická fáze
Stanovení
se provádí v séru, plazmě nebo moči, případně ve slinách.
Vzorky skladovat
v lednici; uváděná stabilita při 2 – 8 °C je 1 týden, při zamrazení déle
(nespecifikováno). Transport v chladu, centrifugovat v chlazené
centrifuze.
Poznámky k analytické metodě
Imunochemické postupy používají nejvíce postup EMIT
s peroxidázovým markerem. Obvyklé je kompetitivní uspořádání. Celková
reprodukovatelnost je považována za vyhovující, pokud CV < 10 %.
Plynová chromatografie používá jako vnitřní
standard 7-β-hydroxyetylteofylin a vysušený vzorek se extrahuje do absolutního etanolu. Chromatografie se
provádí při 120 °C. Mez stanovitelnosti kofeinu byla 15 mg/l a metoda byla
lineární až do 1000 mg/l. Reprodukovatelnost dosáhla CV 2,0 % a vychýlení ±2,1
%.
HPLC pro stanovení v moči
používá mobilní fáze metanol-voda-kyselina octová 20:75:5 a fotometrické
detekce při 273 nm. V moči se stanovují koncentrace 3,21 až 71,2 mg/l.
Reprodukovatelnost v sérii dosáhla CV 0,44 %. Lze připojit i tandemovou
MS s elektrosprejovou ionizací a v kvadrupólové iontové pasti.
V uvedeném případě je celková reprodukovatelnost 7 – 10 %, vychýlení -11
až + 24 % a výtěžnost 81 – 92 %.
Kapilární zónová elektroforéza s fotometrickou detekcí při 200 nm a micelární elektrokinetická
kapilární chromatografie (glycinový pufr s laurylsíranem sodným, pH
10,5) byly rovněž použity ke stanovení kofeinu ve vzorcích séra a moče
s fotometrickou detekcí při 220 nm). V druhém případě byly dosaženy
lepší výsledky a to: mez detekce 0,4 mg/l, mez stanovitelnosti 0,5 mg/l,
reprodukovatelnost v sérii CV sérum 6,95 %, moč 0,68 %, mezi dny sérum 4,07 %,
moč 3,35 %.
Interference
Výsledky stanovení kofeinu v séru snižují: bilirubin (>1020
µmol/l), hemoglobin (> 10 g/l), kouření, aj.
Výsledky stanovení
kofeinu v séru zvyšují:
ciprofloxacin, čaj, enoxacin, flukonazol, lipémie (Intralipid > 7,5 g/l),
káva, norfloxacin, pipemidová kyselina, aj.
Další informace
Petr Štern, 2011-03-02