Stanovení kanabinoidů
Synonyma
cannabis, THC, Δ9-trans-tetrahydrokanabinol,
karboxytetrahydrokanabinol,
bhang, ganja, hašiš, konopí, marihuana
11-nor-9-karboxy-Δ9-tetrahydrokanabinol
Preanalytická fáze
Stanovení v moči: uváděná stabilita při
20 – 25 °C je 10 týdnů, při 4 – 8 °C 1 rok. Při zamrazení na -20 °C je
stabilita 1 rok.
Stanovení
se provádí také v séru nebo plazmě (antikoagulanty EDTA nebo heparin).
Stabilita: 20 – 25 °C 2 měsíce, při 4 – 8 °C 6 měsíců, při -20 °C 6 měsíců.
Kanabinoidy jsou nestabilní v plastových nádobách. Stanovení se provádí i
ve vlasech.
Výsledky mohou být
pozitivní 2 až 5 dní po abstinenci u
občasných kuřáků a 3 až 4 týdny po abstinenci u chronických kuřáků.
Poznámky k analytické metodě
Imunochemické metody měří nejen základní metabolit v moči
11-nor-Δ9-tetrahydrokanabinol-9-karboxylovou kyselinu
(THC-COOH), ale také řadu dalších metabolitů a proto jsou jejich kvantitativní
výsledky 1,5 až 8-krát vyšší, než je skutečná koncentrace THC-COOH stanovená
GC-MS. Všechny nové metody jsou běžně porovnávány s GC-MS, ale její statut
jako referenční metody nebyl dosud navržen.
RIA je založena na kompetitivní
reakci mezi antigenem ze vzorku a antigenem značeným 125I o vazebná
místa ovčí polyklonální protilátky. Po precipitaci, centrifugaci a dekantaci se
měří gama-počítačem aktivita precipitátu. Reprodukovatelnost v sérii je
0,94 – 2,29 %, mezi sériemi 0,54 – 1,88 %. Mez detekce je 2,5 µg/l; výtěžnost
96 – 98 %.
ELISA je založena na kompetitivní
reakci mezi antigenem ze vzorku a antigenem značeným křenovou peroxidázou
(kaboxytetrahydrokanabinol) o vazebná místa polyklonální protilátky zakotvené
na mikrotitračních destičkách. Volné antigeny se vymyjí a po přidání
tetrametylbenzidinu se sleduje zbarvení při 450 nm proti 650 nm.
Reprodukovatelnost v sérii 7,3 – 9,4 %. Mez detekce je 1 µg/l.
Soupravy EMIT jsou dostupné pro běžné analyzátory
s reprodukovatelností v sérii 0,4 – 1,1 %. THC ze vzorku soutěží
s THC značeným glukóza-6-fosfátdehydrogenázou o vazebná místa na
protilátce. Volný konjugát pak redukuje NAD+ na NADH a pokles
absorbance se sleduje fotometricky při 340 nm. Senzitivita analýzy je 97 %,
specifita 98 %.
Fluorescenční homogenní polarizační technika FPIA používá
kompetitivní princip. Vliv všech studovaných interferencí je < 10 %.
Analytická reakce je srovnatelně citlivá pro: 11-Nor-Δ8-THC-9-karboxylovou
kyselinu, 11-OH- Δ9-THC, 8-β-OH-Δ9-THC,
8-β-11-diOH-Δ9-THC a
kanabinol. Mez detekce je 10 µg/l. Reprodukovatelnost
v sérii 1,6 – 2,3 %, mezi sériemi 4,0 – 4,9 %. Výtěžnost je 94,0 – 108,2
%.
Kvalitativní
postup: Konjugát
(THC-protein) imobilizovaný v membráně testovací destičky soutěží
s THC v testované moči o možnost navázaní se na omezené množství
zlatem značených protilátek nanesených na začátek testovací membrány. Barevné
monoklonální protilátky anti-THC jsou spolu s močí posunovány po membráně.
Pokud v moči THC není, dostanou se nenavázané protilátky až k pásu konjugátů ve
sledované oblasti a vytvoří zde barevný pruh, což znamená negativní
výsledek testu. Pokud je v moči THC přítomný, navážou se na něj barevné
protilátky hned na počátku membrány a k pásu konjugátů se již nedostanou. Ve sledované oblasti proto
žádný barevný pás nevznikne, což znamená pozitivní výsledek testu.
TLC – k dispozici je několik metod, ale nejlepšího rozlišení je dosaženo
ve směsi hexan-diethylether 80:20, kdy lze rozlišit Δ8-THC,
Δ9-THC, kanabinol a kanabidiol.
HPLC s detektorem diodového
pole má velmi dobrou rozlišitelnost. Mobilní fází je metanol voda
s postupně se zvyšujícím podílem metanolu. Metoda umožňuje stanovit 7 typů
kanabinoidů s relativním vychýlením od -10,6 do +11,1 %.
Reprodukovatelnost v sérii je od 1,01 do 6,28 % a mezi sériemi 1,93 až
10,94 %. Relativní rozšířená nejistota se pohybovala od 4,1 do 15,4 % pro
jednotlivé hladiny a typy kanabinoidů.
GC-MS vyžaduje extrakci vzorku do
acetonitrilu nebo nověji do β-cyklodextrinu v kopolymeru s
epichlorhydrinem. Takto lze extrahovat Δ9-tetrahydrokanabinol,
11-hydroxy- Δ9-tetrahydrokanabinol a 11-nor-9-karboxy-Δ9-tetrahydrokanabinol.
Reprodukovatelnost metody je 1,2 – 5,1 %, relativní vychýlení -7 až + 11 %,
výtěžnost 85 – 102 %. Mez detekce je 0,2 µg/l.
Interference
Výsledky stanovení kanabinoidů v moči snižují: chlornan sodný,
kyselina octová, tekutá mýdla, aj.
Výsledky stanovení kanabinoidů v moči zvyšuje: glutaraldehyd.
Další informace
Petr Štern, 2011-03-02