Stanovení imunoglobulinu D
Synonyma
IgD
Preanalytická
fáze
Stanovení se provádí v séru nebo plazmě
(antikoagulant EDTA, heparinát lithný), výjimečně v likvoru. Vzorky lze
zamrazit pokud je to nevyhnutné pouze jednou. Maximální čas od získání do
zpracování vzorku je 1 den při doporučené teplotě 4°C.
Stabilita: 18 – 26 °C 1 den, 2
– 8 °C 7 dní, -20° C 10 – 20 let.
Stanovení ruší lipémie, bilirubinémie a hemolýza.
Poznámky k
analytické metodě
Stanovení IgD se provádí imunochemicky.
Z imunochemických metod se nejvíce používá nefelometrie nebo turbidimetrie.
K dispozici jsou komerční soupravy. Reprodukovatelnost nefelometrické
detekce CV v sérii 2,5 – 10,6 %, celková 7,2 – 15,7 %, mez stanovitelnosti
1,3 mg/l. Stejné soupravy jsou použitelné i pro turbidimetrii, ale hodnocení
preciznosti není uvedeno.
Radiální imunodifuze ke stanovení IgD je
poměrně málo citlivá. Podle Manciniové se provádí inkubace 48 h a sleduje se
průměr kruhu precipitátu umocněný na druhou v mm2, který vznikl
reakcí IgD s protilátkou obsaženou v agarovém gelu. Metoda
Fahey-McKelvey umožňuje měřit průměr kruhu ještě před dosažením ekvivalence,
tj. po 18±2 h. Metoda je méně přesná a vyhodnocení se provádí pomocí kruhového
semilogaritmického papíru.
IRMA sendvičová má mez detekce
2,5 µg/l. Reprodukovatelnost CV v sérii < 8,0 %, mezi sériemi 12 %.
Stanovení IgD lze provádět také sendvičovou soupravou ELISA
na mikrotitračních destičkách. Kotvící je králičí polyklonální protilátka
proti IgD. Jako marker druhé protilátky (biotinylovaná kozí polyklonální proti
IgD) se používá křenová peroxidáza se streptavidinem, substrátem je
o-fenylendiamin s peroxidem vodíku. Absorbance se měří při 490 nm. Mez
detekce je 0,1 µg/l. Reprodukovatelnost CV v sérii 6,0 – 9,3 %, mezi
sériemi 10 %; výtěžnost 97 – 113 %. Když je substrát tetrametylbenzidin a detekce
při 450 nm dovoluje měřit v rozsahu 0,1 – 500 mg/l.
Laurelova raketková elektroimunodifuze je imunoprecipitace v agarózovém gelu obsahujícím protilátku. Výška
píku při elektroforéze odpovídá množství imunoglobulinu. Není běžně komerčně
dostupná.
Referenční materiál WHO není
k dispozici, ale od roku 2008 existuje britský standard National Institute
for Biological Standards and Control pro vědecké účely pod označením NIBSC 67/037.
Interference
Výsledky stanovení IgD zvyšují: kouření, těhotenství,
aj.
Další informace
Petr Štern, 2011-03-02