Stanovení celkové vazebné kapacity železa
Synonyma
TIBC (total iron-binding capacity)
Preanalytická fáze
Pro analýzu se používá sérum, případně heparinizovaná plazma.
Výjimečně se stanovuje železo i v moči. Nelze použít chelatační antikoagulanty
(citronan, EDTA, šťavelan). Stažení paže při odběru krve musí být co nejkratší.
Optimální je ranní odběr nalačno, protože vlivem diurnální variace může dojít
k poklesu železa během dne až o 30 %. Vzorek by měl být odstředěn co
nejdříve a to bez separačního gelu, jinak již po 2 h železo v séru začne
stoupat.
Stabilita
železa v séru je při 20 – 25 °C 6 h – 7 dnů, při 4 – 8 °C 3 dny – 3 týdny
a více než 6 měsíců při ‑20 °C (transferin je stabilní 1 měsíc).
Hemolyzované vzorky obsahují železo z erytrocytů a výsledky jsou falešně
zvýšené. Rovněž lipémie ruší stanovení. Výsledky jsou ovlivněny biorytmy,
těhotenstvím, menstruačním cyklem a věkem.
Poznámky k analytické metodě
Spektrofotometrie:
Transferin se nasytí přebytkem železitých iontů. Zbývající volné železo se
odstraní chelatačním činidlem, např. uhličitanem hořečnatým nebo oxidem
hlinitým, které tvoří nerozpustný komplex s volnými železitými ionty.
Železo vázané na transferin se pak stanoví obvyklým fotometrickým postupem ke
stanovení železa. Mez detekce metody je 1,79 µmol/l železa. Rozsah metody je
7,8 – 153,5 µmol/l. Preciznost v sérii dosáhla CV 1,9 – 5,2, celkem 2,9 –
7,6 %.
Lze
použít také iontově-výměnnou techniku, kdy se vzorek nanese na ionexovou
pryskyřici, která byla nasycena železem. Po krátké době dojde k vytvoření
rovnováhy a sérový transferin se nasytí železem, protože afinita železa
k transferinu je vyšší než jeho afinita k pryskyřici. Takto nasycené
sérum se pak analyzuje obvyklým fotometrickým postupem ke stanovení železa.
TIBC lze také stanovit doplňkovým měřením. Standard
železa se inkubuje se sérovým vzorkem při pH 8,5 a tak se nasytí
transferin. Zbývající volné železo se
stanoví obvyklým fotometrickým postupem ke stanovení železa (bez uvolnění
z transferinu). Tím se zjistí úbytek železa ze standardu a to je
nenasycená vazebná kapacita transferinu. Tento výsledek se připočte k výsledku
stanovení železa v sérovém vzorku a získá se údaj o TIBC. Nebo se reakční
směs okyselí na pH 4,5 a z rozdílů měření při obou pH se stanoví TIBC.
Posledně uvedená alternativa je plně automatizovaná metoda. Rozsah
automatizované metody je 1,4 – 171,9 µmol/l železa. Analytická citlivost byla
1,4 µmol/l. Preciznost v sérii dosáhla CV 1,0 – 2,3 %, mezi dny 2,0 – 4,0
%. Interference biliribinu (1026 µmol/l), lipidů (9 mmol/l) a hemoglobinu (0,5
g/l) byly menší než 10 %. Postup je možné i obrátit, tj. napřed měřit
v kyselém prostředí a pak alkalizovat. Transferin pak dokáže vytrhnout
železo z komplexu s chromogenem a sleduje se pokles absorbance. Rozsah
automatizované metody je 2,6 – 119,9 µmol/l železa.Preciznost v sérii
dosáhla CV 0,7 – 2,6 %, celkem 1,4 – 3,3 %.
Stanovení TIBC se považuje za obsoletní a
proto nemá k dispozici referenční materiál ani referenční metodu.
Toleranční limit EHK: se neuvádí
Interference
Koncentraci TIBC v séru a plazmě snižují: alkohol, hypoproteinémie,
chloramfenikol, malnutrice, menstruace, záněty, aj.
Koncentraci TIBC v séru a plazmě zvyšují: Desferal, HELP
(precipitace extrakorporálního heparinem indukovaného LDL), hemolýza, orální
kontraceptiva, těhotenství, aj.
Další informace
Petr Štern, 2011-03-03