Stanovení elastázy
pankreatické
Synonyma
pankreatická elastasa, 3.4.21.36;
pankreatická elastáza I; pankreatická elastasa I; elastasa; serinová elastasa;
elaszym; pankreatopeptidasa E; cholesterol-binding pancreatic proteinase; fecal
pancreatic elastase; fecal elastase 1.
Chemické názvosloví připouští u enzymů pouze koncovku –asa, progresivní
pravopis a řada současných lékařských publikací uvádí koncovku –áza. V
anglickém názvosloví EC je kmenový základ elastase vždy samostatně. Pro enzym
3.4.21.36 se používá zkratka Elastase 2 (Google 564
000), Elastase I (Google 415 000), případně ELA1 (Google 120
000), ale mezinárodně uznávaná zkratka neexistuje.
Preanalytická fáze
Stanovuje se
v séru (odběr ráno nalačno) a ve stolici (jednorázový vzorek ~1 g). Stabilita v séru 5
d až 2 měsíce při 4 – 8 °C, 1 rok při -20 °C. Stabilita ve stolici 3 d při 2 –
8 °C, 1 rok při -20 °C; při 22 °C pokles o 8 % za 1 týden. Enzymy používané
terapeuticky neovlivňují stanovení. Test není vhodný jako screening.
Poznámky k analytické
metodě
IRMA se provádí ve zkumavkách potažených králičí polyklonální
protilátkou vůči elastase. Po přidání vzorku se provádí inkubace 2 h při 37 °C
a přes noc při 4 °C. Po trojnásobném promytí fosfátovým pufrem se vysysuje
hovězím albuminem ve fosfátovém pufru 4 h při 37 °C. Po trojnásobném promytí
fosfátovým pufrem se přidá králičí protilátka vůči elastáze značená 125I.
Inkubuje se přes noc při 4 °C a po promytí fosfátovým pufrem se měří
radioaktivita gama-počítačem. Preciznost v sérii 3,9 – 5,7 %, mezi sériemi
4,0 – 5,7 %
ELISA v sendvičovém uspořádání probíhá v mikrotitrační destičce se
zakotvenou polyklonální protilátkou vůči elastáze. Do jamky se přidá standard
nebo vzorek a inkubuje se 120 min; přidá se biotinylovaná polyklonální
protilátka vůči elastáze. Po inkubaci 60 min a trojnásobném promytí se přidá
streptavidin s navázanou křenovou peroxidázou a inkubuje se 30 min. Po
inkubaci a pětinásobném promytí se přidá chromogen tetrametylbenzidin a reakce
probíhající 15 – 25 min je zastavena stop činidlem (0,25 M H2SO4).
Měření se provádí ihned při 450±10 nm a signál je přímo úměrný koncentraci
elastázy. Celý postup se provádí při 37 °C. Rozsah měření při sedmibodové
kalibraci je 62,5 – 4000 ng/l. Analytická citlivost metody je 62,5 ng/l.
Preciznost pro sérum v sérii < 10 %, mezi sériemi < 12 %; linearita
ředění 85 – 104 %.
ELISA stolice v sendvičovém uspořádání probíhá v mikrotitrační
destičce se zakotvenou polyklonální protilátkou vůči elastáze. Do jamky se
přidá standard nebo vzorek a inkubuje se 60 min; po trojnásobném promytí se
přidá biotinylovaná polyklonální protilátka vůči elastáze. Po inkubaci 30 min a
trojnásobném promytí se přidá streptavidin s navázanou křenovou
peroxidázou a inkubuje se 30 min. Po inkubaci a trojnásobném promytí se přidá
chromogen tetrametylbenzidin a reakce probíhající 20 min je zastavena stop
činidlem (0,25 M H2SO4). Měření se provádí ihned při
450/550 nm a signál je přímo úměrný koncentraci elastázy. Celý postup se
provádí za laboratorní teploty. Rozsah metody ve stolici je 5,5 – 500 µg/g.
Preciznost pro stolici v sérii 4,3 – 5,2 %, mezi sériemi 7,7 – 7,9 %.
Analytická citlivost 5,5 µg/g.
ELISA výsledky jsou vyšší než RIA. Soupravy používají polyklonální
protilátky, protože jsou citlivější než monoklonální.
Interference
Hodnoty ve stolici snižuje: vodnatá stolice, vystavení stolice vyšší
teplotě.
Hodnoty v séru zvyšuje kouření.
Další
informace
Petr
Štern, 2014-01-28