Stanovení elastázy polymorfonukleární
Synonyma
leukocytární elastasa, 3.4.21.37;
polymorfonuklearní leukocytární elastáza; polymorfonuklearní leukocytární
elastasa; elastasa; lyzozomalní elastasa; neutrofilní
elastasa; granulocytární elastasa; serinová elastasa; elaszym;
Chemické názvosloví připouští u enzymů pouze koncovku –asa, progresivní
pravopis a řada současných lékařských publikací uvádí koncovku –áza. V
anglickém názvosloví EC je kmenový základ elastase vždy samostatně. Mezinárodně
uznávaná zkratka enzymu 3.4.21.37 neexistuje, ale běžně se používá
označení Elastase II (Google 746 000), Elastase 2
(Google 523 000), ELA 2 (Google 352 000), případně PMN
elastase (Google 42 200).
Preanalytická fáze
Stanovuje se
v plazmě (EDTA, citronan), popřípadě likvoru nebo ejakulátu. Odběr nalačno není nutný. Plazmu je
třeba separovat krátce po odběru a zpracovat do 24 h při přechovávání při 2 – 8
°C, dlouhodobě skladovat při -28 °C. Vyloučit opakované rozmrazení.
Poznámky k analytické
metodě
ELISA v sendvičovém uspořádání probíhá v mikrotitrační destičce se
zakotvenou protilátkou vůči elastáze. Do jamky se přidá standard nebo vzorek a
inkubuje se 2 h; po čtyřnásobném promytí se přidá biotinylovaná protilátka vůči
elastáze. Po inkubaci 1 h a čtyřnásobném promytí se přidá streptavidin s
navázanou křenovou peroxidázou a inkubuje se 30 min (nebo lze použít druhou protilátku přímo konjugovanou na POD). Po
inkubaci a promytí se přidá chromogen tetrametylbenzidin a reakce probíhající 7
min je zastavena stop činidlem (0,5 M HCl). Měření se provádí ihned při 450/570
nm a signál je přímo úměrný koncentraci elastázy. Celý postup se realizuje za
3,5 (2,5) h. Rozsah měření při
sedmibodové kalibraci je 15,6 - 1000 µg/l. Analytická citlivost metody je 3
µg/l (může být až 0,2 µg/l při variantě
se zesílenou citlivostí). Preciznost v sérii 4,8 %, mezi sériemi 5,6
%. Linearita ředění je 89 – 109 %, zpětný výtěžek 84 – 109 %.
Interference
Hodnoty zvyšuje: odběr srážlivé krve, hemolýza, chylozita, hemodialýza.
Další
informace
Petr
Štern, 2014-01-28