Stanovení specifického
těhotenského beta1-glykoproteinu (SP1)
Synonyma
Specifický
těhotenský protein, SP1, PSG1, RHSP1
(Recombinant Human), pregnancy specific beta1-glycoprotein, transkripční faktor
Sp1, TSFP1, specifity protein 1
Preanalytická fáze
Stanovení se provádí v séru nebo plazmě (antikoagulans
EDTA nebo heparin) nebo v supernatantu buněčných kultur. Maximální
čas od získání do zpracování vzorku je 1 d při doporučené teplotě 4°C.
Jinde se uvádí stabilita 1 d při 18
– 26 °C, 7 d při 4 – 8 °C a 12 týdnů při -20 °C, resp. 6 měsíců při -80 °C.
Poznámky k analytické
metodě
RIA má příliš velkou citlivost (rozsah 7 – 440 µg/l)
a je příliš pomalá (kompetitivní imunoreakce s 125I-SP1 a králičí protilátkou 16 – 24 h,
precipitační reakce s oslí protilátkou 0,5 – 4 h). Mez detekce metody
je 2 µg/l.
ELISA je sendvičového typu. Protilátka vůči SP1 je
zakotvena v jamkách mikrotitračních destiček. Přidá se standard nebo
vzorek (pipetování ukončit do 10 min). Po inkubaci (37 °C, 1,5 h) a odsátí se
přidá druhá protilátka vůči SP1 s biotinylovou kotvou. Po inkubaci (37 °C,
1h) a promytí (3x pufrem) následuje připojení křenové peroxidázy přes avidinový
můstek (inkubace 37 °C, 30 min). Poté se jamky 5x promyjí a přidá se
tetrametylbenzidin. Další inkubace je ve tmě (37 °C, 15 min) a pak se přidá
stop činidlo. Detekce se provádí při 450 nm (možno i bichromaticky při 540 nebo
570 nm). Modrá barva roztoku se po okyselení mění na žlutou. Rozsah metody 1 –
400 mg/l. Detekční limit 1 mg/l. Preciznost v sérii < 8 %, mezi sériemi 10
%.
Interference
Snížená hladina až o 50 % 24 – 50 h po porodu.
Zvýšená hladina v těhotenství (ve 40. týdnu až 20x).
Další
informace
Petr
Štern, 2014-01-28