Stanovení telopeptidu kolagenu C-terminálního (ICTP)

Synonyma

C-telopeptid kolagenu typu I, cross-linked carboxy-terminal telopeptide of type I collagen, CTX-I

Preanalytická fáze

Stanovení se provádí v plazmě (antikoagulans EDTA nebo heparin) nebo moči (24 h sběr). Odběr krve po celonočním hladovění, před odběrem nelze pít. 1 den před odběrem vyloučit intenzivní cvičení (u špičkových gymnastek trvalé zvýšení).

Stabilita v séru při 15 – 25 °C i při 4 °C 5 dnů, při -20 °C 1 – 6 měsíců.

Poznámky k analytické metodě

RIA je kompetitivní postup, kdy vzorky a kalibrátory jsou inkubovány 2 h za stálého třepání při 37 °C s ¹²⁵I-ICTP a králičí protilátkou vůči ICTP ve zkumavkách. Po inkubaci se přidá separační činidlo (polyetylenglykol s kozí protilátkou vůči králičímu IgG) a směs se inkubuje za stálého třepání 30 min při laboratorní teplotě. Po centrifugaci (30 min, 2000 g) se obsah zkumavek dekantuje, vyklepe na filtrační papír a měří se radioaktivita gama-počítačem (1 min). Signál je nepřímo úměrný koncentraci ICTP ve vzorku. Rozsah měření na základě sedmibodové kalibrace 1 – 50 µg /l (vzorky s koncentrací > 50 µg/l se ředí nulovým kalibrátorem). Analytická citlivost je 0,4 µg/l. Preciznost v sérii je 3,5 – 9,4 %, mezi sériemi 5,6 – 9,0 %; zpětný výtěžek 96 -106 %. Lipémie ruší při stanovení. Nevadí hemoglobin < 5g/l, bilirubin < 400 µmol/l, triacylglyceroly < 5,6 mmol/l.

ELISA na mikrotitračních destičkách je sendvičový postup, který používá zakotvenou protilátku vůči ICTP a do jamek se přidává vzorek nebo kalibrátor a druhá protilátka vůči ICTP značená POD. Po inkubaci (1 h, 37 °C, třepání) a promytí 3x se přidá tetrametylbenzidin s H₂O₂. Roztok se inkubuje 15 min (37 °C, třepání) ve tmě, pak se pipetuje stop činidlo. Absorbance při 450 nm se měří do 10 min a je přímo úměrná koncentraci ICTP ve vzorku. Na základě šestibodové kalibrace je rozsah metody 25 – 800 µg /l (při vyšších koncentracích se ředí nulovým kalibrátorem). Analytická citlivost je 12,5 µg/l. Preciznost v sérii je < 15 %, mezi sériemi < 15 %.

Interference

Snížené hodnoty: efekt nadbytku antigenu (> 150000 ng/l), antiresorpční léčba (bisfosfonáty, estrogeny), opakované rozmrazení vzorku.

Zvýšené hodnoty: v moči koncem těhotenství a v menopauze. Exkrece močí v noci o 50 % vyšší než ve dne.

Další informace

Principy analytických postupů

Petr Štern, 2014-01-28