Stanovení trypsinového inhibitoru asociovaného s tumorem (TATI)

Synonyma

tumour-associated trypsin inhibitor, pancreatic secretory trypsin inhibitor, serine protease inhibitor, serine protease inhibitor Kazal-type 1, Kazal type 1, PCTT, PSTI, Spink3, TCP

Preanalytická fáze

Stanovení se provádí v séru nebo plazmě (antikoagulans EDTA nebo heparin), případně v moči (jednorázově nebo sběr za 24 h). Analyt je stabilní v séru i moči 48 h při 4 °C a dlouhodobě při -20 °C. Opakované rozmrazení se nedoporučuje.

Poznámky k analytické metodě

IRMA používá protilátku vůči TATI vázanou na pevnou fázi, na kterou se váže TATI ze vzorku a pak na něj druhá protilátka vůči TATI značená ¹²⁵I. Imunoradiometrické stanovení TATI probíhá ve dvou krocích. Nejprve se ve zkumavkách potažených první protilátkou inkubují vzorky nebo kalibrátory. Po inkubaci se obsah zkumavek odsaje a přidá se do nich druhá protilátka značená ¹²⁵I. Po druhé inkubaci se odsaje obsah zkumavek a vymyje se nenavázaná značená protilátka. Vázaná aktivita ¹²⁵I se měří na gama-počítači 1 min. Koncentrace TATI v kalibrátorech a vzorcích je přímo úměrná změřené radioaktivitě. Preciznost v sérii 7,6 %, mezi sériemi 9,4 %. Souprava již není k dispozici.

ELISA v sekvenčním uspořádání probíhá v mikrotitrační destičce se zakotvenou protilátkou vůči TATI. Do jamky se přidá standard nebo vzorek a inkubuje se 2 h při 37 °C. Roztok se odsaje a přidá se biotinylovaná protilátka vůči TATI a opět se inkubuje 1 h při 37 °C. Po trojnásobném promytí se přidá avidin s navázanou křenovou peroxidázou a opět se inkubuje 1 h při 37 °C. Po pětinásobném promytí se přidá chromogen tetrametylbenzidin a reakce je zastavena po 15 – 30 min (37 °C, tma) stop činidlem. Měření se provádí do 5 min při 450 nm (lze použít sekundární vlnovou délku 540 – 570 nm). Rozsah měření je 0,8 – 45 µg/l (vyšší koncentrace analytu lze naředit). Detekční limit je 0,8 µg/l. Preciznost v sérii je < 8 %, mezi sériemi < 10 %.

DELFIA je heterogenní fluorescenční imunoanalýza, kde prodloužená fluorescence Eu³⁺ je zesílena speciálním roztokem, který uvolňuje Eu³⁺ do roztoku a současně tvoří jeho ochranný chelát. Mikrotitrační destičky jsou potaženy monoklonální myší protilátkou F62-6E8. Po pipetování vzorku proběhne inkubace 1 h (třepání, laboratorní teplota). Po dvojnásobném promytí se přidá biotinylovaná monoklonální myší protilátka F62-11B3 (které se dává přednost před polyklonální králičí protilátkou) a opět se inkubuje 1 h (třepání, laboratorní teplota). Po čtyřnásobném promytí se přidá streptavidin značený Eu³⁺ a roztok se inkubuje 30 min; pak následuje další čtyřnásobné promytí, přidá se zesilovací roztok a třepe se 5 min za laboratorní teploty. Fluorescence (Eu³⁺ emise 613 nm) je přímo úměrná koncentraci TATI ve vzorku a měří se do 1 h. Na základě sedmibodové kalibrace je rozsah metody 0,13 – 150 µg/l. Analytická senzitivita je 0,1 µg/l. Preciznost v sérii 3,5 – 9, 7 %, mezi sériemi 10,7 – 12,5 %.

Interference

Zvýšené hodnoty: zánětlivé gynekologické stavy (CRP > 100 mg/l), pooperační stavy, renální insuficience, akutní pankreatitis, biliární obstrukce, citrulinémie II. typu.

Další informace

Principy analytických postupů

Petr Štern, 2014-01-28