Laktátdehydrogenáza
Synonyma
(S)-laktát:NAD+ oxidoreduktáza (S = sodná sůl), 1.1.1.27;
L-laktátdehydrogenasa; L(+)-nLDH; L-(+)-laktátdehydrogenasa;
dehydrogenáza kyseliny mléčné; dehydrogenáza kyseliny L-mléčné;
laktátdehydrogenasa NAD-dependentní; NAD-laktátdehydrogenasa.
Chemické názvosloví připouští u enzymů pouze koncovku –asa, progresivní
pravopis a řada současných lékařských publikací uvádí koncovku –áza. Prof.
Kodíček uvádí celý název jako jedno slovo, v anglickém názvosloví EC je kmenový
základ (např. dehydrogenase) vždy samostatně. Mezinárodní zkratka L(+)-nLDH se
příliš nepoužívá (Google 25 700), daleko frekventovanější jsou označení LD
(Google 2 290 000) nebo LDH (Google 577 000).
Preanalytická fáze
Stabilita:
2 - 3 dny při 20 - 25 °C (za 24 h pokles aktivity 10 %), 4 dny při 4 - 8 °C, 4 týdny při -20 °C, 6
měsíců při -80 °C. V plastových zkumavkách dochází ke slabému poklesu
aktivity.
Při stanovení z plazmy mohou být výsledky nižší až o 40 %. To je pravděpodobně tím, že chybí LD, která je obsažena v trombocytech.
Hemolýza
zvyšuje hodnoty. Ponechá-li se sérum nad sraženinou krevních elementů je
aktivita za 1 h o 25 % vyšší.
Fluoridy,
oxaláty a citrany aktivitu enzymu inhibují. Aktivitu také snižuje opakované
zamrazování vzorku.
Nižší
hodnoty LD jsou také u alkoholiků. U žen v zimním období pozorován pokles
aktivity LD. Intraindividuální variabilita aktivity LD je přibližně 13 %.
Poznámky
k analytické metodě
Při konverzi laktátu na pyruvát je reakce 20 s nelineární (fáze
prodlevy), poté je lineární, dokud vznikající produkt nezačne inhibovat reakci.
Inhibice produktem je jak ve směru vzniku pyruvátu z laktátu, tak ve směru
opačném. Při vzniku pyruvátu nesmí reakční rychlost překročit 0,5 A/min, jinak
už neprobíhá kinetika nultého řádu. V případě vyšší rychlosti je potřebné
vzorek před analýzou ředit. Oxidace laktátu na pyruvát je méně závislá na
koncentraci NAD+ a laktátu a kontaminaci NAD+ inhibičními
produkty. Tato metoda je doporučená IFCC. Doporučuje se používat směs volné
kyseliny a lithné soli NAD+, což umožňuje udržet konstantní pH,
které je pro rychlé dosažení lineární odezvy reakce důležité. Metoda IFCC je
dvoureagenční (1 díl séra + 20 dílů roztoku laktátu s N-metyl-D-glukaminovým
pufrem + 2 díly roztoku NAD+ a po 90 s fázi prodlevy měřit při
340 nm alespoň 6 bodů po dobu 180 s).
Předností opačné reakce, tedy redukce pyruvátu na laktát je vyšší
rychlost a nižší cena činidla, jakož i o něco lepší přesnost metody. Nicméně
standardizace metody je obtížná, neboť značně závisí na zdroji NADH použitém
v reakci.
Při metodě Kodak Ektachem je při nálezech bílkoviny 120 g/l aktivita LD
zvýšená.
Certifikovaný referenční materiál není zatím
dostupný.
Interference
Aktivitu laktátdehydrogenázy zvyšují:
amiodaron, anabolické steroidy, dalacin, dikumarol, gentamicin, interleukin-2, izotretinoin,
kyselina valproová metotrexát, nitrofurantoin, penicilamin, sulfisoxazol, xylitol,
aj.
Další informace
Postupy pro
hodnocení aktivit enzymů
Postupy
pro hodnocení koncentrací proteinů
Petr Štern, 2009-11-03