Obecné chemické reakce aminokyselin jsou dány přítomností reaktivních skupin v molekule.

 

Příklady

·         Ninhydrinová reakce: a-aminokyselina reaguje s ninhydrinem za vzniku modrého produktu diketohydrindyliden-diketohydrinaminu

·         Sangerova reakce: a-aminokyselina a 2,4-dinitrofluorbenzen reagují za vzniku 2,4-dinitrofenylaminokyseliny (žluté zbarvení)

·         Reakce s dansylchloridem (1-dimethylaminonaftalen-5-sulfochloridem): produktem a-aminokyseliny s dansylchloridem je dansylaminokyselina, která fluoreskuje

·         Edmanova reakce: a-aminokyselina a fenylisothiokyanát dává produkt fenylhidantoin

·         Reverzibilní reakce a-aminokyselin s aldehydy:

R₁CHO + R₂CH(NH₂)COOH <=> H₂O  +  R₁CHNCH(R₂)COOH

produktem reakce je Schiffova báze (meziprodukt enzymových reakcí)

 

 

Analytické možnosti stanovení aminokyselin v biologických materiálech

Pro stanovení jednotlivých aminokyselin převládá použití separačních postupů: 

·         Chromatografie-tenkovrstvá

·         Chromatografie-vysokoúčinná tenkovrstvá

·         Chromatografie-kapalinová

·         Chromatografie-plynová

·         Elektroforéza-vysokoúčinná kapilární

·         a další.

 

 

Pro úspěšnou analýzu je podstatná vhodná volba separačních podmínek k rozdělení směsi aminokyselin a

způsob jejich detekce.

 

 

 

Stanovení aminokyselin v biologických materiálech

Rozlišují se screeningové testy a kvantitativní testy pro sledování nebo potvrzení diagnózy.

 

Screeningové testy

·         TLC v analýze aminokyselin

·         Fotometrie v analýze aminokyselin

·         Guthrieho test v analýze aminokyselin

 

Kvantitativní testy pro sledování nebo potvrzení diagnózy

·         GLC v analýze aminokyselin

·         HPLC v analýze aminokyselin

·         IEC v analýze aminokyselin

·         MS/MS v analýze aminokyselin

·         Kapilární elektroforéza v analýze aminokys.

 

 

Při použití tenkovrstevné chromatografie (TLC) je znalost obecných reakcí aminokyselin využívána k odkrytí skvrn  prostřednictvím použitého detekčního činidla, jehož reakcí s aminokyselinou je obvykle zajištěna identifikace skvrn (barevná, UV, fluoreskující). TLC v analýze aminokyselin se používá jako screening. Kapalinová chromatografie (obvykle HPLC) využívá obvykle derivatizačních postupů (před nebo za separační kolonou), pro identifikaci a kvantifikaci jednotlivých aminokyselin je rutinně využíváno detekce fotometrické nebo fluorescenční. HPLC v analýze aminokyselin se používá jako kvantitativní test pro sledování nebo potvrzení diagnózy.

 

 

Jaroslava Vávrová

 

.