Spermiogram
Sperma se odebírá po 2-3 denní pohlavní abstinenci (dlouhá abstinence není žádoucí, snižuje se pohyblivost spermií) při pečlivém dodržení hygieny. Odběr je proveden masturbací do speciální sterilní nádobky. Část se použije pro vyšetření spermiogramu, zbytek pro další indikovaná vyšetření.
Vyšetření spermiogramu zahrnuje zjištění koncentrace, celkového množství, pohyblivosti a morfologie spermií a přítomnost příměsí. Zároveň s vyšetřením spermiogramu zjišťujeme objem ejakulátu a jeho vzhled. Pohyblivost a koncentrace se stanovují v nativním vzorku vyšetřením fázovým kontrastem při zvětšení 400x v Maklerově komůrce. Podrobnou diagnostiku morfologie spermií a diagnostiku příměsí provádíme v nátěru ejakulátu obarveném podle Papanicolaua nebo hematologickým barvením podle Pappenheima nebo obdobným, při zvětšení 1000x v imerzním mikroskopu.
Biochemické vyšetření ejakulátu
V historii bylo učiněno mnoho pokusů o zpřesnění diagnostiky kvality spermií pomocí biochemického vyšetření ejakulátu. Většina vyšetření nepřispívá k objasnění etiologie ani prognózy poruch spermatogeneze, proto nejsou běžně prováděna.
Jako užitečné se ukázalo vyšetření indikátorovým papírkem určeným k vyšetření moči, kterým zjistíme pH a orientačně přítomnost krve, leukocytů a bakterií.
Mikrobiologické vyšetření ejakulátu
Základním mikrobiologickým vyšetřením ejakulátu, které provádíme vždy, když mikroskopicky nebo indikátorovým papírkem prokážeme přítomnost leukocytů nad 1x106/ml, nebo před použitím ejakulátu pro asistovanou reprodukci, je bakteriologické kultivační vyšetření, speciální vyšetření na Ureaplasma urealyticum a na přítomnost chlamydií v ejakulátu (nejlépe prokázat imunocytochemicky v nátěru).
Vyšetření integrity chromatinu spermií – SCSA
SCSA je metoda založená na vyhodnocení fragmentace DNA ve spermiích. Spermie jsou in vitro za definovaných podmínek barveny v kyselém prostředí akridinovou oranží a cytoflowmetrem je vyhodnocována intenzita červené a zelené fluorescence jednotlivých spermií. Poměr červené a celkové fluorescence odpovídá poměru denaturované a celkové DNA. Výsledky jsou vysoce reprodukovatelné a silně korelují s mužskou fertilitou. Při fertilizaci in vitro velmi dobře korelují s vývojem embryí do stadia blastocysty, pregnancy rate a frekvencí spontánních abortů.
Vyšetření spermií metodou FISH
Při vyšetření hlaviček spermií metodou fluorescenční in situ hybridizace po předchozí dekondenzaci chromatinu můžeme znázornit části jednotlivých chromozómů. Tak lze zjistit přítomnost a frekvenci početních a strukturních chromozomálních aberací ve spermiích. Frekvence aberací ve spermiích nemusí být v důsledku procesů probíhajících při meiotickém zrání spermií shodná s frekvencí v periferní krvi a vyšetření spermií může mít prognostický význam pro odhad šance vzniku geneticky normálního nebo balancovaného embrya.
Literatura
WHO laboratory manual for the examination of human semen and sperm-cervical mucus interaction. IV edition 1999
Evenson DP, Jost LK, Marshall D, Zinaman MJ, Clegg E, Purvis K, de Angelis P and Clausen OP (1999) Utility of the sperm chromatin structure assay as a diagnostic and prognostic tool in the human fertility clinic. Hum Reprod 14,1039-1049.
Další informace
Pavel Trávník