Asistovaná reprodukce: Vyšetření oocytů
Lidský oocyt je buňka o průměru 120 µm, kulovitého tvaru, obklopená průhledným obalem, který se nazývá zona pellucida. Zralý oocyt obsahuje haploidní počet chromozómů, z pohlavních chromozómů obsahuje vždy jen chromozóm X. Neobsahuje zásobní látky, rovněž neobsahuje centriol. Přináší embryu cytoplazmu a mitochondrie a další buněčné struktury.
Zatímco kolem 85 % zralých lidských oocytů může být úspěšně oplozeno, jen asi 30 %-40 % z nich je schopno dát základ embryu, které se vyvine až k porodu živého novorozence. Kvalita oocytů klesá s postupujícím věkem ženy, takže kolem věku 40 let je podíl oocytů schopných po oplození dalšího vývoje minimální. Kvalita oocytů má řadu složek, především to je genetická kvalita (přítomnost aneuploidií a mutací), kterou můžeme posoudit pomocí preimplantační genetické diagnostiky, a dále kvalita cytoplazmatických struktur. K tomu při asistované reprodukci přistupuje ještě problematika zralosti oocytů, protože při stimulaci ovarií nedosahuje celá populace oocytů stejného stupně dozrání. Pouze oocyty, které jsou v době odběru oocytů v metafázi II, případně dokončují 1. zrací dělení, jsou schopny oplození a dalšího vývoje. Oocyt je ve spontánním cyklu ovulován a stejně při punkci ovariálních folikulů získáván společně s velkou skupinou granulózových buněk. Je to několikamilimetrový útvar zvaný cumulus oophorus, v němž je uložen oocyt. Tento komplex kumulus – oocyt volně plave ve folikulární tekutině, které je v jednom preovulačním folikulu kolem 10 ml.
Hodnocení zralosti oocytů
Zralost oocytu můžeme orientačně posuzovat v komplexu kumulus-oocyt, jak je získán při punkci a podrobně po denudaci – odstranění kumulárních buněk a mezibuněčné matrix kombinovaným působením hyaluronidázy a mechanického čištění (připrava k ICSI).
Pokud hodnotíme zralost komplexu kumulus – oocyt (v tomto stavu se používá ke klasické IVF), vycházíme především ze vzhledu kumulu. Velký, expandovaný, průhledný a tažný kumulus svědčí pro to, že oocyt v něm obsažený je s velkou pravděpodobností v metafázi II. zracího dělení. Naopak malý, hutný kumulus signalizuje nezralost komplexu, oocyt je pravděpodobně ve stadiu zárodečného váčku.
Vyhodnocení denudovaného oocytu umožňuje přesnou klasifikaci. Zralý oocyt v metafázi II obsahuje pod zona pellucida první pólové tělísko, prostor mezi oocytem a zonou je volnější, cytoplazma neobsahuje jádro. Oocyt v metafázi I neobsahuje pólové tělísko, štěrbina mezi oocytem a zonou je úzká. Oocyt ve stadiu zárodečného měchýřku obsahuje zřetelné buněčné jádro a pod zona pellucida není přítomno pólové tělísko.
Hodnocení morfologie oocytů
Kvalitní oocyt má kulovitý tvar, je obklopen pravidelnou zona pellucida, neobsahuje vakuoly (jejich přítomnost svědčí pro autolytické procesy) ani shluky pigmentu (svědčí pro apoptózu probíhající v atretických folikulech). První pólové tělísko má být celistvé, nefragmentované. V polarizačním mikroskopu by mělo být v době provedení ICSI zřetelně patrné kompaktní dělící vřeténko.
Literatura
Scott L: The biological basis of non-invasive strategies for selection of human oocytes and embryos. Human Reproduction Update, Vol.9, No.3 pp. 237-249, 2003
Ebner T, Moser M, Sommergruber M, Yaman C, Pfleger U, Tews G: First polar body morphology and blastocyst formation rate in ICSI patients. Human Reproduction 17, No. 9 pp. 2415-2418, 2002
Další informace
Pavel Trávník