Příklady separačních podmínek pro stanovení vitamínů
|
Vitamín,
analyt |
Metoda,
materiál |
Připrava
vzorku, kolona, mobilní fáze |
detekce |
|
|
vitamín
A retinol |
GC plazma |
denaturace
etanolem, extrakce n-hexanem WCOT
metylsilikon, 0,25 μm He |
FID MS |
Vitamíny
rozpustné v tucích |
|
vitamín
A retinylestery |
GC plazma |
denaturace
etanolem, extrakce n-hexanem WCOT
metylsilikon, 0,1 μm He |
FID MS |
|
|
vitamín
A 13-cis-, all-trans-retinoly |
LC mléko |
saponifikace
za chladu, extrakce n-hexan:dietyléter (85:15, v/v) Apex
silica, 3 μm 1-5%
2-propanol v heptanu |
UV 340
nm |
|
|
vitamín
A retinol |
LC sérum |
denaturace
acetonitrilem, extrakce n-hexanem Zorbax
ODS, 5 μm acetonitril-CH2Cl2-MeOH
(70:15:15) |
UV 330
nm |
|
|
vitamín
A retinol |
LC sérum |
denaturace
etanolem, extrakce n-hexanem Polygosil
60, 5 μm Hexan-CH2Cl2-2-propanol
(90:10:1) |
FD 333/470
nm |
|
|
vitamín
A retinylestery |
LC jaterní
tkáň |
extrakce
dichlormetanem Resolve
C18, 5 μm acetonitril-CH2Cl2
(80:20) |
UV 325
nm |
|
|
beta-karoteny cis + trans-beta-karoten,
alfa-karoten, lutein, lycopen |
LC potraviny |
extrakce
metanol-chloroform Vydac
201 TP, 5 μm metanol-chloroform
(96:4) |
UV/VIS 450
nm |
|
|
beta-karoteny beta-karoten, alfa-karoten,
lycopen, beta-kryptoxantin (+ retinol, alfa-tokoferol) |
LC plazma |
SDS,
extrakce etanol + heptan Spherisotb
ODS-2, 3 μm acetonitril-MeOH-chloroform
(47:47:6) |
UV/VIS 450
nm |
|
|
beta-karoteny beta-karoten, alfa-karoten (+
retinol, alfa-tokoferol) |
LC sérum |
extrakce
etanol + hexan Ultrasphere
ODS, 5 μm acetonitril-MeOH-dichlormetan
(70:10:20) |
UV/VIS 450
nm |
|
|
beta-karoteny 18 karotenoidů |
LC |
extrakce
etanol + dietyléter A:
Microsorb C18, 5 μm, B: Nitrilová fáze, 5 μm A:
acetonitril-dichlormetan-hexan-metanol (45:22.5:22.5:10), B:
hexan-dichlormetan-metanol-diisopropyletylamin (74.65:25:0.25:0.10) |
UV/VIS 445,
475 nm |
|
|
beta-karoteny beta-karoten, alfa-karoten,
lycopen, beta-kryptoxantin, lutein |
LC tkáň |
enzymové
štěpení, homogenizace, extrakce etanol + acetonitril + hexan Ultracarb
C18, 5 μm acetonitril-THF-metanol-1%
octan amonný (65:25:6:4) |
UV/VIS 450
nm |
|
|
vitamín
D D2, D3,
25-OHD2, 25-OHD3 |
GC plazma |
deproteinace
acetonitrilem, SPE: C18 silica 2%
OV-1 He |
MS |
|
|
vitamín
D 1,25(OH)2D3 |
GC plazma |
deproteinace
chloroform-metanol, sephadex LH-20 1.5%
SE-30 He |
MS |
|
|
vitamín
D D3 |
LC fortifikované
mléko |
extrakce
etanol + NH4OH + dietyléter-hexan Zorbax
Sil, 10 μm Hexan-2-propanol
(99:1) |
UV 265
nm |
|
|
vitamín
D 25-OHD2, 25-OHD3 |
LC sérum |
deproteinace
acetonitrilem, SPE: C18 silica Zorbax
Sil, 10 μm Hexan-2-propanol
(98:2) |
UV 254
nm |
|
|
vitamín
D D2, D3 |
LC sérum |
deproteinace
metanolem, extrakce hexanem Ultrasil
ODS, 10 μm metanol |
UV 264
nm |
|
|
vitamín
D 25-OHD3 |
RIA plazma |
deproteinace
acetonitrilem Nucleosil-10-NO2,
10 μm gradient
hexan: hexan-2-propanol-voda (28:12:0.42) |
kompetitivní
reakce |
|
|
vitamín
D 1,25(OH)2D3 |
RIA plazma |
extrakce
benzenem RSIL-silica,
5 μm hexan-2-propanol
(9:1) |
kompetitivní
reakce nebo RIA |
|
|
vitamín
D 25-OHD3, 1,25(OH)2D3,
24,25(OH)2D3 |
RIA plazma |
deproteinace
metanol-HCl, SPE C18 |
kompetitivní
reakce |
|
|
vitamín
D 1,25(OH)2D3 |
RIA sérum |
saponifikace,
extrakce dichlormetanem |
kompetitivní
reakce |
|
|
vitamín
E alfa-tokoferol (+ retinol) |
LC sérum |
extrakce
etanol + hexan RSIL-C18,
10 μm metanol |
UV 292
nm |
|
|
vitamín
E alfa-tokoferol, gama-tokoferol |
LC plazma |
extrakce
metanolem Bondapak
C18 metanol-voda
(98:2) |
FD 292/335
nm |
|
|
vitamín
E alfa-, beta-, gama,
delta-tokoferoly |
LC potraviny |
saponifikace,
extrakce dietyléter-petroléter RAD-PAK
C18, 5 μm metanol |
FD 295/330
nm |
|
|
vitamín
K K1 |
LC plazma |
denaturace
metanolem, extrakce n-hexanem Ultrasphere
ODS, 5 μm, 25 x acetonitril:dichlormetan
(70:30) |
UV 254
nm |
|
|
vitamín
K K1 |
LC sérum |
denaturace
etanolem, extrakce n-hexanem Zorbax
ODS, 5 μm 30
mmol/l octan sodný pH 6 v etanol:voda (96,5:3,5) |
FD 340/430
nm |
|
|
vitamín
K K1 |
LC plazma |
denaturace
etanolem, extrakce n-hexanem RSIL
C18 HL, 5 μm metanol:etyacetát
(96:4) + (CH3)4NB3H8 (2 g/l) |
FD 325/430
nm |
|
|
vitamín
K K1 |
LC plazma |
denaturace
etanolem, extrakce n-hexanem Hypersil
ODS, 5 μm 2,0
mol/l ZnCl2, 1,0 mol/l octan sodný, 1.0 mol/l kyselina octová v
metanol:dichlormetan (80:20) |
FD 248/418
nm |
|
|
vitamín
C askorbová kyselina |
LC plazma |
extrakt
s 5% metafosforečnou kyselinou Spherisotb
NH2 MeCN/5
mmol/l fosfát (75:25) |
UV 254
nm |
Vitamíny
rozpustné ve vodě |
|
vitamín
B1 thiamin |
LC potraviny |
extrakt
s 0,1 mol/l HCl, předkolonová oxidace, čištění Sep-Pak C18 Bondapak
C18 metanol/5
mmol/l octan amonný, pH 5, (28:72) |
FD 370/430
nm |
|
|
vitamín
B2 riboflavin |
LC potraviny |
extrakt
s 0,1 mol/l HCl, předkolonová oxidace, čištění Sep-Pak C18 Bondapak
C18 metanol/5
mmol/l octan amonný, pH 5, (28:72) |
FD 370/520
nm |
|
|
vitamín
B3 niacin, nikotinamid |
LC krev,
moč, tkáně |
extraktce
dietyléterem nebo metanolem C18
ODS MeCN/
10mmol/l fosfátový pufr pH 3 (4:96) |
UV 260
nm |
Další informace:
·
Vitamíny
·
Vitamíny: příprava vzorků
k analýze
Jaroslava Vávrová