Vitamín B12: metody

Vitamín B₁₂ - metody stanovení

 

Zjišťování plazmatických hladin vitamínu B₁₂, homocysteinu a folálu má význam pro diferenciální diagnózu anémií, které provázejí deficit obou těchto vitamínů.

Metody stanovení převážně využívají imunoanalytických postupů.

 

Doporučovaný algoritmus vyšetření

 

 

 

 

Stanovení B₁₂ je založeno na  kompetitivní imunoreakci s vnitřním faktorem s následnou reakcí s alkalickou fosfatázou značenou protilátkou proti vnitřnímu faktoru. Běžně se využívá možností automatických imunoanalyzátorů s fluorescenční nebo luminiscenční detekcí.

 

Vitamín B₁₂ ze vzorku se z vazby na transportní proteiny uvolní jejich denaturací za přítomnosti roztoku NaOH a KCN s dithiothreitolem. Zároveň dojde k inaktivaci protilátek proti vnitřnímu faktoru. Reakce probíhá v analyzátoru za inkubace při 37°C. Všechny formy vitamínu B₁₂ se přemění na cyanocobalamin. Vitamín B₁₂ ve vzorku se váže na vnitřní faktor konjugátu a zabraňuje jeho vazbě na imobilizovanou fázi komplexu vnitřního faktoru. Neimobilizovaný materiál se odstraní promýváním. Přidá se substrát, který hydrolyzuje stykem s alkalickou fosfatázou za vzniku nestabilního meziproduktu.Ten se ihned rozpadá za produkce záření, které se detekuje luminometrem. Intenzita vzniklého záření je nepřímo úměrná koncentraci vitamínu B₁₂ ve vyšetřovaném vzorku.

 

Důraz je kladen na dodržování preanalytických pravidel:

·       Vzorky je třeba chránit před přímým světlem

·       Vzorky séra je možné skladovat 8 hodin při 2 - 8°C nebo 1 měsíc při -20 °C

·       Rozmražování vzorků je možné pouze jednou a to zásadně při teplotě 15 - 30°C

 

Další informace

·        Vitamín B12

·        Vitamíny

·        Vitamíny rozp. ve vodě

·        Vitamíny: metody analýzy

 

Literatura

Worsfold P., Townshend A., Poole C. Eds.: Encyclopedia of Analytical Science, Second edtion, Academic press, Elsevier. ISBN 0-12-764100-9. Vol. 9, s. 147-180.

 

Jaroslava Vávrová