Kyselina listová: metody

Kyselina listová - metody stanovení

 

Zdá se, že nejvhodnějším způsobem sledování celkového stavu zásobení organismu kyselinou listovou je sledování koncentrace v plné krvi, hodnoty folátu v erytrocytech jsou signifikantně vyšší než hodnoty v séru. Hladina folátů v erytrocytech je vhodnější pro sledování dlouhodobého zásobení, nereflektuje bezprostředně na fluktuaci sníženého příjmu vitamínu dietou.

 

Metody mikrobiologické

Jsou založeny na růstu foláty vyžadujících mikroorganismů proporcionálně s množstvím folátů přítomných v biologickém materiálu. Monitorování se provádí turbidimetricky. Metody se užívá už jen vyjímečně.

 

Metody imunochemické

Metody stanovení folátů v séru i v erytrocytech jsou zastoupeny v současné době především imunoanalytickými postupy uplatňovanými na automatických imunoanalyzátorech. Tyto analýzy jsou časově dostupné výrazně lépe než dříve využívané postupy mikrobiologické. Tabulka naznačuje orientační hodnoty pro oblast hodnocení normálních, snížených a deficitních stavů.

Doporučuje se výsledky měření korelovat při interpretaci s hodnotami vitamínu B₁₂ a s homocysteinem.

Stanovení je založeno na  kompetitivní imunoreakci s vazebným proteinem a imobilizací vzniklého komplexu, následovanou značením enzymem vazbou avidin – biotin.

Folát ze vzorku soutěží s neizotopově značeným folátem o omezené množství čištěného folát vázajícího proteinu, který sám je kovalentně vázán. Nenavázaný materiál se odstraní promýváním. Přidá se konjugát alkalické fosfatázy s avidinem, který se naváže pouze na komplex vazebného proteinu se značeným folátem. Nenavázaný materiál se odstraní opět promýváním. V závěrečné fázi se přidá substrát, jehož vlastnosti souvisí se způsobem následující detekce, např. pro hodnocení luminiscence vzniká působením substrátu nestabilní meziprodukt bezprostředně se rozpadající za produkce záření, které se detekuje luminometrem. Intenzita vzniklého záření je pak nepřímo úměrná koncentraci folátu ve vyšetřovaném vzorku.

 

(nmol/l)	norma	snížené hodnoty	deficit
Novorozenci v séru	15,9 – 72,4
dospělí v séru	> 13,5	6,7 – 13,4	< 6,7
dospělí v erytrocytech	> 360	315 – 359	< 315

 

Důraz je kladen na dodržování preanalytických pravidel:

·         Vzorky je třeba chránit před přímým světlem

·         Vzorky séra je možné skladovat 8 hodin při 2 - 8°C nebo 1 měsíc při -20 °C

·         Rozmražování vzorků je možné pouze jednou a to zásadně při teplotě 15 - 28°C

·         Hemolyzát plné krve se uchovává 3 hodiny při 2 - 8 °C nebo 2 týdny při -20 °C

 

Další informace

·        Kyselina listová

·        Vitamíny

·        Vitamíny rozp. ve vodě

·        Vitamíny: metody analýzy

·        Vitamíny: přepočty

·        Vitamíny: příklady separačních metod

·        Vitamíny: příprava vzorků k analýze

 

Literatura

Worsfold P., Townshend A., Poole C. Eds.: Encyclopedia of Analytical Science, Second edtion, Academic press, Elsevier. ISBN 0-12-764100-9. Vol. 9, s. 147-180.

 

Jaroslava Vávrová