Ligandová (vazebná) analýza je metodický princip založený na specifické reakci ligandu a vhodného vazebného činidla (reagens). Obvyklou variantou jsou imunoanalytické metody, využívající reakci mezi antigenem a specifickou protilátkou. Ligandová analýza bývá někdy označována jako saturační analýza, protože v základním principu dochází k postupné saturaci vazebných míst vazebným reagens. Současná nabídka těchto metod je velmi široká a jejich uplatnění rovněž.

Průběh reakce lze posuzovat buď pomocí sledování nezreagované části některého z reaktantu, nebo častěji detekcí vznikajícího komplexu ligand-vazebné reagens. Obvykle se tak děje pomocí označení jednoho z účastníků reakce vhodným indikátorem. V praxi však našly uplatnění i metody, které nepoužívají indikátor. K označování byly zpočátku používány především různé radionuklidy (odtud označení metody - "radioimunoanalýza" nebo "RIA“ (viz též Radioizotopové analytické metody). Dnes jsou používány i jiné typy indikátorů (enzymy, fluorescenční, chemiluminiscenční indikátory aj.) a rovněž i jiné principy vazebných reakcí.

Předností těchto metod je jejich vysoká citlivost, specifita a přesnost, dovolující stanovovat látky obsažené v biologických materiálech v koncentracích řádově 10^‑9 mol.l^-1 až 10^-15 mol.l^-1 bez předchozí úpravy biologických vzorků. Metody jsou poměrně snadno proveditelné a dnes již i plně automatizovatelné.

Základní informace o ligandové analýze

Základní reakční schéma obecné reakce ligandu s vazebným reagens lze vyjádřit vztahem:

L + VR « L-VR

Při reakci vzniká komplex ligand-vazebné reagens (L-VR). Rovnováha této reakce je se řídí Guldberg-Waagovým zákonem a je charakterizována asociační konstantou K_as.

Metody ligandové analýzy lze podle jejich základních metodických principů lze rozdělit na:

· Kompetitivní metody ligandové analýzy

· Nekompetitivní metody ligandové analýzy

· Imunochemické metody – imunoanalýza

Základní komponenty imunochemických reakcí

Zásadní rozdíly mezi jednotlivými typy ligandových analýz neimunochemické povahy jsou v charakteru vazby. U metod kompetitivní vazby s proteiny (CPBA), které převážně využívají jako vazebnou látku některý nosný protein séra, je ligand vázán slabě, vazby ligandu na enzym a receptor jsou silnější. Metody se liší i z hlediska jejich specifičnosti. Nejvýznamnějšími vazebnými reagens pro imunologickou analýzy jsou specifické protilátky, které vznikají v organismu jako imunitní odpověď na stimulaci antigenem.

Další informace a hesla:

· Imunochemické techniky

· Ligandová analýza: ligand

· Ligandová analýza - reagens

· Ligandová analýza - protilátky

· Vazebná místa protilátky

· Vazebné místo (binding site)

· Ligandová analýza - příprava Ab

· Ligandová analýza - imunoanalýza

· Ligandová analýza - interakce Ag-Ab

· Ligandová analýza - kompetitivní metody

· Ligandová analýza - nekompetitivní metody